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Agonista selectivo del receptor de andrógenos

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Estoy buscando un inductor que active fuertemente el receptor de andrógenos, pero no el receptor de glucocorticoides que no esté regulado por la DEA. Sé que los SARMS (moduladores selectivos de receptores de andrógenos) son un tema candente en algunos rincones de algunos campos, pero tengo algunos problemas en mi laboratorio para encontrar uno. Mi investigación requiere la inducción independiente de AR (receptor de andrógenos). ¿Alguien sabe cómo realizar esta búsqueda o conoce algún químico?


Eche un vistazo al artículo de Ojasoo et al. [1] Informa la afinidad de unión relativa de una amplia variedad de esteroides para AR, PR y GR.

La nandrolona (19-ni testosterona) no tiene ninguna afinidad por el GR, pero es un potente activador del AR. Sin embargo, tiene cierta afinidad por el receptor de progesterona (¿importa esto para su investigación?). Además, la nandrolona unida al AR también se une a los elementos de respuesta al estrógeno (¿esto es importante para su investigación?).

5a-DHT también es un potente activador de AR sin afinidad por el GR. Tenga en cuenta que un metabolito de 5a-DHT tiene una afinidad significativa por el receptor de estrógeno, podría ser importante para su investigación.

También puede utilizar un antagonista de GR fuerte junto con un andrógeno que también tenga cierta afinidad por el GR. Luego, simplemente puede usar metiltrienolona, ​​que se usa comúnmente como ligando AR.

En una nota al margen: tenga en cuenta que los andrógenos generalmente solo conducen a una disociación significativa de un ligando de GR para el GR a concentraciones muy altas. Por lo tanto, es muy probable que los andrógenos actúen como antagonistas de GR mediante la formación de heterodímeros del AR con GR [2], así como mediante el silenciamiento [3].

Referencias

  1. Ojasoo, T., et al. "Hacia el mapeo de los receptores de progesterona y andrógenos". Journal of steroid biochemistry 27.1 (1987): 255-269.
  2. Chen, Sei-yu y col. "Formación de heterodímeros del receptor de andrógenos y glucocorticoides: un posible mecanismo para la inhibición mutua de la actividad transcripcional". Revista de química biológica 272.22 (1997): 14087-14092.
  3. Zhao, Jingbo y col. "La oxandrolona bloquea la señalización de glucocorticoides de una manera dependiente del receptor de andrógenos". Esteroides 69.5 (2004): 357-366.

Agonistas de los receptores de andrógenos como terapéuticos del cáncer de mama

Los modelos de cáncer de mama con receptor de estrógeno positivo se utilizan para explorar el fundamento de los agonistas de los receptores de andrógenos como tratamientos para el cáncer de mama.

En la primera mitad del siglo XX, las personas comenzaron a tratar el cáncer de mama con andrógenos basándose en la hipótesis de que esta hormona sexual masculina podría inhibir la actividad de la hembra 2, que se sabía que favorecía el desarrollo del cáncer de mama. Este enfoque indujo respuestas 3, pero incluso en los primeros informes, existía la preocupación de que los andrógenos pudieran estimular la progresión tumoral en un subconjunto de pacientes 2. De manera similar, el estrógeno en sí mismo pareció impulsar la tumorigénesis de mama e inducir respuestas, a una tasa modestamente más alta que la de los andrógenos 3. La terapia con andrógenos fue una terapia prevalente en todo el mundo para el cáncer de mama hasta la década de 1970, cuando se desarrollaron terapias efectivas dirigidas a ER y se encontró que tenían menos efectos secundarios. Hoy en día, el desarrollo de agentes mejor tolerados que pueden modular la actividad de la RA, incluidos los agonistas (como los moduladores selectivos de la RA), así como los antagonistas, ha renovado la posibilidad de manipular esta vía para mejorar los resultados de los pacientes, intensificando la urgencia de comprender la biología. de la señalización AR en el cáncer de mama.


Los moduladores selectivos del receptor de andrógenos activan el programa canónico de receptores de andrógenos del cáncer de próstata y reprimen el crecimiento del cáncer.

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El cáncer de próstata (CP) es impulsado por la actividad del receptor de andrógenos (AR), un regulador maestro del desarrollo y la homeostasis de la próstata. Las terapias de primera línea para la PC metastásica privan al AR de los ligandos activadores testosterona (T) y dihidrotestosterona (DHT) al limitar su biosíntesis o bloquear la unión del AR. En particular, la señalización de AR es dicotómica e induce el crecimiento a niveles de actividad más bajos, mientras que suprime el crecimiento a niveles más altos. Estudios clínicos recientes han explotado este efecto mediante la administración de concentraciones suprafisiológicas de T, lo que ha dado como resultado respuestas clínicas y mejoras en la calidad de vida. Sin embargo, el uso de T como agente terapéutico en oncología está limitado por propiedades deficientes similares a las de los fármacos, así como por un metabolismo rápido y variable. Aquí, investigamos los efectos antitumorales de los moduladores selectivos de AR (SARM), que son agonistas de AR no esteroideos de molécula pequeña desarrollados para tratar el desgaste muscular y la caquexia. Varios SARM administrados por vía oral activaron el programa AR en modelos de PC. Los cistromas AR regulados por andrógenos esteroides y SARM eran superponibles. Las proteínas correguladoras, incluidas HOXB13 y GRHL2, comprendían complejos AR ensamblados por andrógenos y SARM. A concentraciones biodisponibles, los SARM reprimieron la expresión de la oncoproteína MYC e inhibieron el crecimiento de PC sensible a la castración y resistente a la castración in vitro e in vivo. Estos resultados respaldan una mayor investigación clínica de los SARM para el tratamiento de la PC avanzada.

Las células epiteliales secretoras de la próstata y los derivados neoplásicos dependen del receptor de andrógenos (AR) para regular la diferenciación, el metabolismo, el crecimiento y la supervivencia (1 - 3). Actualmente, la inhibición de la señalización de AR mediante la terapia de privación de andrógenos (ADT), que implica varios medios para privar a los tumores de los ligandos AR testosterona (T) y dihidrotestosterona (DHT), es el enfoque terapéutico predominante para tratar el cáncer de próstata metastásico (mPC) (4 ). Aunque la ADT es muy eficaz inicialmente, el mPC progresa a cáncer de próstata metastásico resistente a la castración (mCPRC) en 1 a 3 años (5).

Los mecanismos de resistencia al ADT son diversos. La mayoría de los mCRPC reactivan la señalización de AR a través de Arkansas amplificación, la producción de variantes de empalme AR, Arkansas mutación o cambios en los cofactores AR (5). Aunque la reorientación de la señalización de AR en mCRPC con potentes antagonistas de AR como enzalutamida (ENZ) o inhibidores de CYP17A como abiraterona (ABI) extiende la supervivencia, las respuestas a estos tratamientos promedian solo unos pocos meses (6, 7). La inhibición a largo plazo de la actividad AR puede resultar en complicaciones significativas en la calidad de vida relacionadas con la disminución de la masa muscular, la reducción de la densidad ósea, la disfunción eréctil, la anemia, el aumento de la grasa corporal, los eventos cardiovasculares y los sofocos (8, 9). Además, la evidencia emergente indica que la supresión potente de la señalización de AR puede promover la transdiferenciación en variantes altamente agresivas, incluidas aquellas con características de células pequeñas y neuroendocrinas.

El desarrollo de nuevos enfoques terapéuticos que aprovechen la ventana terapéutica proporcionada por la RA, mientras se mantiene la calidad de vida, podría tener un impacto clínico sustancial. La terapia con andrógenos suprafisiológicos (SAT) es un enfoque que potencialmente es capaz de lograr un beneficio doble. Aunque controvertido y algo contrario a la intuición como estrategia de tratamiento, SAT se basa en experimentos in vitro de larga data que demuestran que las altas concentraciones de andrógenos inducen la detención del ciclo celular en las células PC activas en AR (10, 11). La SAT se ha evaluado clínicamente mediante el tratamiento de pacientes con ciclos mensuales de terapia con dosis altas de T alternados con concentraciones bajas de andrógenos, una estrategia denominada terapia con andrógenos bipolares (BAT). BAT se ha mostrado prometedor tanto en eficacia como en seguridad, con tasas de respuesta de aproximadamente el 30% en pacientes con mCPRC muy pretratados que progresaron con ENZ (12). Además, en algunos pacientes, BAT vuelve a sensibilizar a los mCRPC al retratamiento con terapia antiandrogénica y mejora las métricas de calidad de vida (12 - 14). Dada la capacidad del mCRPC para adaptarse a los niveles de andrógenos estáticos a lo largo del tiempo, el dinamismo de esta terapia puede ser crucial para prevenir o retrasar los cambios genéticos y epigenéticos que engendran un estado de enfermedad resistente a la terapia.

A pesar del potencial de BAT, existen importantes inconvenientes en el uso de T como reactivo terapéutico. La T tiene poca biodisponibilidad oral y propiedades similares a las de un fármaco y se metaboliza en varios compuestos como DHT, estradiol y otros derivados con actividad biológica que podrían inducir efectos secundarios no deseados. Debido a su rápido metabolismo, es un desafío controlar los niveles de testosterona y establecer regímenes de dosificación optimizados. La administración de T se basa en geles transdérmicos o i.m. Las inyecciones y altas dosis de andrógenos esteroides pueden resultar en daño orgánico, incluyendo hepatotoxicidad, eritrocitosis y complicaciones cardiovasculares, así como actividades lipogénicas desfavorables al disminuir el HDL y aumentar los triglicéridos (15 - 18). Dados estos problemas, las alternativas a la T que inducen las funciones supresoras de tumores de la RA mientras pasan por alto los efectos androgénicos deletéreos de los esteroides pueden ser terapias ideales.

Los moduladores selectivos del receptor de andrógenos (SARM) se desarrollaron como un sustituto de los andrógenos esteroides para tratar una variedad de afecciones que incluyen el síndrome de insensibilidad parcial a los andrógenos (PAIS), caquexia, sarcopenia relacionada con la edad, osteoporosis y ciertas distrofias musculares (19 - 21). Las moléculas que se acoplan al dominio de unión al ligando del AR caen a lo largo del espectro de antagonista a agonista completo. Para mejorar la seguridad y la tolerabilidad, los SARM fueron diseñados para ser agonistas AR parciales, permitiendo funciones anabólicas que apoyan la salud sistémica mientras mitigan las funciones androgénicas de la T que inducen efectos secundarios no deseados, incluido el potencial de promover la patología de la próstata (20, 21). Los estudios clínicos y preclínicos demostraron que los SARM pueden soportar la masa muscular sin hipertrofia prostática o alteraciones en las características sexuales secundarias (19, 22 - 25). Los SARM no esteroides también tienen propiedades farmacológicas favorables y pueden administrarse por vía oral (23, 26) o transdérmica (27). Además, las características farmacológicas de los agonistas no esteroides permiten una mayor seguridad y un mayor control sobre el momento y la dosis (19, 25, 26, 28). A diferencia de T, los SARM no son sustratos de enzimas metabolizantes como la 5α-reductasa, 17β-HSD y CYP19.

En este estudio, buscamos probar la hipótesis de que los SARM pueden reprimir el crecimiento de PC mediante la activación del programa AR canónico y, en consecuencia, sustituir los andrógenos esteroides como terapéuticos con propiedades farmacocinéticas y farmacodinámicas favorables.

Los SARM y los andrógenos reprimen el crecimiento de las células PC e inducen cambios transcripcionales concordantes. Varios estudios han demostrado que altas concentraciones de T pueden suprimir el crecimiento de células PC in vitro e in vivo (14, 29 - 32). Intentamos determinar si los SARM no esteroideos y biodisponibles por vía oral pueden ejercer efectos similares. Seleccionamos varios SARM que habían progresado a través de varias etapas de evaluación preclínica o clínica y demostraron efectos fisiológicos y falta de toxicidad. GTX-024, también conocido como enobosarm, se ha estudiado ampliamente en humanos, con ensayos clínicos que evalúan los efectos sobre la caquexia por cáncer y la atrofia muscular (33). GTX-024 y un SARM relacionado, GTX-027, suprimieron el crecimiento de xenoinjertos de cáncer de mama triple negativo (TNBC) sin efectos adversos en la salud animal (34). GTX-024 se evaluó en ensayos clínicos de fase II de cáncer de mama AR-positivo (NCT02971761 NCT02368691), sin señales de seguridad adversas informadas (35). Se demostró que el SARM-2F apoya la masa muscular, prostática y de vesículas seminales en ratas después de la castración y mejora los resultados en un modelo de caquexia por cáncer (23). Además, el SARM-2F aumentó la masa corporal magra en primates y fue bien tolerado (19). Se ha demostrado que el compuesto SARM-26 (Cpd26) activa de forma potente el AR y apoya el crecimiento anabólico in vivo y puede administrarse por vía transdérmica (27).

Tratamos la línea celular LNCaP PC sensible a andrógenos con rangos de concentración de varios SARM: GTX-024, GTX-027, SARM-2F y T8039. Comparamos los SARM con 2 agonistas esteroides de AR, T y R1881, así como con el antagonista de AR ENZ. Los 4 SARM suprimieron el crecimiento de células LNCaP en aproximadamente un 40% en relación con el control (P & lt 0,001) y alcanzaron su efecto máximo a aproximadamente 100 nM. En comparación, R1881 y T produjeron una supresión máxima del crecimiento de aproximadamente el 50% a aproximadamente 1 nM (P = 6,6 × 10 –7) y aproximadamente 10 nM (P = 6,2 × 10 –8), respectivamente (Figura 1A). Las concentraciones de ENZ de 1 μM produjeron la máxima represión del crecimiento de las células LNCaP, lo que redujo la viabilidad celular en un 32% en comparación con el control del vehículo (P = 5,0 × 10 –5), de acuerdo con estudios previos de ENZ en este modelo (Figura 1A y refs. 36, 37). Otros dos SARM, lgd-4033 y RAD-140, no lograron suprimir el crecimiento de las células LNCaP (Figura complementaria 1, material complementario A y B disponible en línea con este artículo https://doi.org/10.1172/JCI146777DS1), lo que indica que Las diferencias moleculares en las estructuras SARM influyen en las respuestas celulares (Figura complementaria 2, A – F).

Los moduladores selectivos de AR activan el programa de AR canónico en células PC y reprimen la proliferación de células tumorales. (A) Se determinaron las curvas de dosis-respuesta en la línea celular LNCaP para los andrógenos esteroides R1881 y T, el antiandrógeno ENZ y los agonistas AR no esteroideos T8039, GTX-024, GTX-027 y SARM-2F (n = 4). Los datos representan la media ± DE. (B) Dosis de R1881 y SARM elegidas para el análisis de RNA-Seq. Se muestran mapas de calor de expresión génica para los 100 genes principales (C) inducida o (D) reprimido por el tratamiento con 1 nM R1881 (n = 2). (mi) Mapa de calor de expresión génica de los genes que componen la firma ARG.10. (F) Mapa de calor de puntuación de firma GSVA para los conjuntos de genes regulados por AR ARG.10, AR_Induced y AR_Repressed.

Los SARM se desarrollaron para ser agonistas parciales con el fin de minimizar la activación de AR androgénicos en la próstata. Sin embargo, los SARM pueden actuar como antagonistas de AR en ciertos contextos e interferir con la activación de AR. Para determinar si los efectos supresores del crecimiento de los SARM se deben a la activación o supresión de la señalización de AR, medimos los niveles de transcripción global por RNA-Seq en células LNCaP tratadas durante 48 horas con SARM-2F, T8039 o GTX-024 100 nM. Estas concentraciones de SARM produjeron una supresión máxima del crecimiento de las células LNCaP in vitro (Figura 1B), y se han logrado niveles superiores a 100 nM en roedores, primates y humanos sin toxicidad (19, 38). Como comparación, también realizamos RNA-Seq en células LNCaP tratadas durante 48 horas con un rango de dosis de R1881 10 pM, 100 pM y 1 nM para medir los cambios transcripcionales correspondientes a la supresión del crecimiento no, intermedia y máxima (Figura 1B ). Los genes regulados al alza en el mayor grado por 1 nM R1881 también fueron fuertemente regulados al alza por cada SARM, incluidos los genes diana AR canónicos KLK3, FKBP5, STEAP4, MAF, NDRG1, y SLC25F2 (Figura 1C). Como era de esperar, estas transcripciones fueron reprimidas por el tratamiento con ENZ (Figura 1C). Los genes más reprimidos por R1881 1 nM, incluidos UGT2B17, BCHE, y CAMK2N1, fueron reducidos en un grado similar por los SARM (Figura 1D).

Utilizamos el análisis de variación del conjunto de genes (GSVA) ​​para confirmar que la exposición a SARM alteraba las vías de expresión génica asociadas con estudios previos de la actividad de AR y / o respuestas de andrógenos. Las puntuaciones de las firmas genéticas asociadas con la actividad de AR (ARG.10, AR inducida y AR reprimida) se alteraron concordantemente (Figura 1, E y F), lo que sugiere que los efectos supresores del crecimiento de los SARM reflejan la activación en lugar de la represión de AR señalización. Utilizando un ensayo ortogonal, confirmamos los cambios en los niveles de expresión de los genes diana AR canónicos FKBP5, KLK3, y AMACR mediante PCR cuantitativa de transcripción inversa (qRT-PCR) en células LNCaP y VCAP (Figura complementaria 3, A – F) y cambios transcripcionales observados en concentraciones de SARM que reprimían el crecimiento celular (Figura complementaria 3, G – I).

El tratamiento con SARM induce la detención del crecimiento del ciclo celular y reprime la expresión de MYC. Estudios anteriores han demostrado que los cambios en la expresión génica asociados a la proliferación reflejan la eficacia de la exposición a andrógenos en dosis altas (29). Para determinar si ocurren cambios similares con el tratamiento SARM, realizamos GSVA en los conjuntos de datos de RNA-Seq para evaluar la actividad de los conjuntos de genes asociados con la proliferación y la actividad del ciclo celular. Estos incluyeron 31 genes que comprenden una puntuación de progresión del ciclo celular (CCP.31) (39) y genes que exhiben respuestas bifásicas a los andrógenos, por lo que la expresión era baja en células inactivas en ausencia de andrógenos, aumentaba con la inducción de la proliferación a niveles bajos de andrógenos. concentraciones, y luego disminuyó con altas concentraciones de andrógenos (bifásicos) junto con la detención del crecimiento (29). Los cambios inducidos por el tratamiento con SARM coincidieron con las respuestas a concentraciones de R1881 10 pM y 100 pM para T8309, y R1881 1 nM para SARM-2F y GTX-024 (Figura 2, A y B). A continuación, utilizando la colección de conjuntos de genes HALLMARK, realizamos un análisis de enriquecimiento de conjuntos de genes (GSEA) en las mediciones de RNA-Seq de células tratadas con ENZ, R1881 y SARM. Para identificar los conjuntos de genes de mayor relevancia para el fenotipo de crecimiento suprimido, comparamos la dosis más alta de R1881 que admite la proliferación completa, 10 pM, con una concentración que suprime la proliferación, R1881 100 pM (Figura 4A complementaria). De acuerdo con informes anteriores, los conjuntos de genes más reprimidos fueron HALLMARK_E2F_TARGETS y HALLMARK_MYC_TARGETS_V1 (29). Los SARM suprimieron de forma potente la expresión génica de las vías E2F y MYC, así como los genes asociados con la G2/ M punto de control (Figura 2C).

Los SARM suprimen los niveles de MYC y la expresión génica asociada a la proliferación. (A) Mapa de calor de puntuación de firma GSVA de conjuntos de genes relacionados con el ciclo celular a partir de datos de RNA-Seq. (B) Mapa de calor del registro centrado en la media de RNA-Seq2(CPM) para los genes característicos de la progresión del ciclo celular. (C) Puntuaciones de enriquecimiento normalizado (NES) de GSEA trazadas para conjuntos de genes Hallmark. (D) Porcentaje de células LNCaP en fase S cuando se tratan durante 48 horas con ENZ 10 μM, R1881 5 nM o SARM 5 μM (n = 3). *P & lt 0.05, por ANOVA de 1 vía con la prueba de comparación múltiple de Sidak. Los datos representan la media ± DE. (mi) Se realizaron inmunotransferencias para p16, p21, AR, FOXM1 y MYC en células LNCaP tratadas con R1881 5 nM, SARM 5 μM o 0,4 μg / ml de mitomicina-C durante 6 días.

Para evaluar más a fondo los efectos de los SARM en la proliferación celular, realizamos un análisis del ciclo celular utilizando un pulso de 1 hora de EdU como marcador de fase S en células LNCaP tratadas durante 48 horas con 5 nM R1881, 10 μM ENZ o 5 μM SARM-2F, GTX-024 o T8039. Todos los tratamientos redujeron el número de células en la fase S de aproximadamente un 17% a un 2% -5% (P & lt 0.05 Figura 2D). Después de 6 días de tratamiento con SARM, no observamos ningún aumento en los niveles de p16 o p21, lo que indica que las células no estaban en un estado senescente (Figura 2E). Los niveles de proteína AR en las células LNCaP no cambiaron drásticamente con el tratamiento con SARM (Figura 2E). Estudios anteriores han informado que los niveles de andrógenos suprafisiológicos reprimen MYC, y determinamos que la exposición a SARM también redujo los niveles de MYC en las células LNCaP (ref. 40 y Figura 2E). Dos factores de transcripción, FOXM1 y MYBL2, que se sabe que son reprimidos por el socio de dimerización, el complejo RB-like, E2F y multi-vulval clase B (DREAM) y que participan en la regulación de la quiescencia y la fase del ciclo celular de ontología génica (GO), se redujeron mediante el tratamiento con SARM en Células LNCaP y VCaP (ref. 41, Figura 2E y Figura complementaria 5, A – D).

A diferencia de los SARM disponibles por vía oral, las formulaciones transdérmicas tienen la ventaja de evitar el metabolismo oral-hepático de primer paso, lo que podría producir mejoras adicionales en la seguridad y la eficacia (27, 42). Evaluamos los efectos de uno de esos SARM, Cpd26 (27), en modelos CRPC. Cpd26 suprimió de forma potente el crecimiento de células LNCaP, VCaP y 22PC-EP (Figura 3A). Cpd26 también suprimió los niveles de MYC y FOXM1, pero no tuvo ningún efecto sobre p21 (Figura 3B). Expresión de genes inducidos por andrógenos KLK3, FKBP5, y AMACR aumentó con el tratamiento con Cpd26, con efectos de saturación que se produjeron cerca de 1 nM (Figura 3, C y D). El gen reprimido por andrógenos UGT2B17 (Figura 3E) y genes relacionados con el ciclo celular CDK1, FOXM1, y MYBL2 también fueron reprimidos de una manera dependiente de la dosis (Figura 3, F – H). Cpd26 indujo cambios transcripcionales similares en células VCaP que expresaban un WT AR (Figura 6 complementaria, A – F).

El SARM Cpd26 suprime de forma potente el crecimiento de la PC e induce la expresión génica del epitelio luminal. (A) Curva dosis-respuesta del SARM transdérmico Cpd26 en células LNCaP, VCaP y 22PC-EP (n = 4). Los datos representan la media ± DE. (B) Inmunotransferencias de las proteínas del ciclo celular p21, MYC y FOXM1 en células LNCaP tratadas con R1881, ENZ o Cpd26. Los valores de qRT-PCR se representan para las células LNCaP tratadas con ENZ, R1881 o dosis de Cpd26 durante 48 horas, midiendo la expresión de los genes activados por AR (C) KLK3 y (D) FKBP5 el gen reprimido por AR (mi) UGT2B17 y los genes del ciclo celular (F) CDK1, (GRAMO) FOXM1, y (H) MYBL2 (n = 8). *P & lt 0.05, por ANOVA de 1 vía con la prueba de comparación múltiple de Dunnett. Los datos representan la media ± DE.

Los cistromas de PC AR regulados por SARM y andrógenos son concordantes. Para comparar cómo los andrógenos esteroides y los SARM no esteroides especifican la localización del AR en la cromatina, evaluamos los sitios de unión al ADN del AR en todo el genoma con la escisión bajo los objetivos y la liberación utilizando el método de nucleasa (CUT & ampRUN) después de la exposición de las células LNCaP a R1881, T8039, SARM-2F y GTX-024. Los picos de AR inducidos por SARM fueron muy similares a los inducidos por R1881 (Figura 4A). Encontramos que los sitios de unión a AR unidos a SARM se asociaron con objetivos de AR canónicos, incluidos KLK3 (Figura 4B) y FKBP5 (Figura 4C). A nivel mundial, los conjuntos de picos SARM y R1881 anotaron características genómicas muy similares. Además, el análisis de motivos estableció que los SARM, como R1881, inducían la unión a elementos de respuesta de andrógenos (ARE), así como a motivos de cofactores establecidos para FOXA1 y HOXB13 (Figura 4D).

Los SARM y los andrógenos esteroides regulan los cistromas AR concordantes en la PC. (A) Mapa de calor de la unión de AR inducida por SARM a sitios de unión de AR inducidos por R1881 determinados por CUT y ampRUN. Comparación de SARM y la unión de AR inducida por esteroides cerca de (B) KLK3 y (C) FKBP5 (los picos son representativos de 2 réplicas biológicas). (D) Análisis de motivos de sitios vinculados a AR en tratamientos con R1881 y SARM (para todos los grupos, q & lt 0,0001).

Andrógenos de dosis alta y SARM de dosis alta indujeron la unión de AR a sitios superpuestos. En general, los cistromas de R1881 y SARM fueron muy similares: 9320 de 11,287 (83%) sitios ganados con el tratamiento de SARM se superpusieron con los de R1881 de alta concentración (Figura 5A). Mientras que los cistromas R1881 y SARM AR se solapaban en gran medida, había 952 sitios unidos diferencialmente entre SARM y R1881 y, de estos, el 96% se obtuvo en las células tratadas con R1881 (Figura 5B). Estas diferencias también se reflejaron en el análisis de componentes principales (PCA), con réplicas de R1881 agrupadas fuera de las muestras de SARM (Figura complementaria 7B). Presumimos que los sitios AR adicionales de R1881 representan loci genómicos con menor afinidad AR y se perderían con concentraciones más bajas de R1881. Para explorar esto, realizamos CUT & ampRUN usando 5 nM, 1 nM, 100 pM y 10 pM de R1881 para determinar los sitios perdidos o ganados con agonismo de AR reducido. En comparación con los grupos de dosis baja (100 pM, 10 pM y DMSO), identificamos 11,859 sitios que estaban unidos diferencialmente con dosis altas de R1881 (5 nM y 1 nM, Figura 7C suplementaria) y los grupos de dosis de R1881 asociados por su nivel de agonismo por PCA (Figura complementaria 7D). Los perfiles de unión a AR inducidos por SARM de dosis alta agrupados con los grupos de R1881 de dosis alta (Figura 5C), y 910 de los 952 sitios que se unieron diferencialmente entre SARM y R1881 también se unieron de manera diferencial entre dosis bajas y altas de R1881 ( Figura 5D). Tomados en conjunto, estos datos sugieren que el pequeño subconjunto de sitios AR que se unieron diferencialmente entre el tratamiento con R1881 y SARM se debieron a un nivel ligeramente más bajo de agonismo.

Andrógenos de dosis alta y SARM de dosis alta indujeron la unión de AR a sitios superpuestos. (A) Diagrama de Venn de sitios enlazados diferencialmente entre R1881 de dosis alta y baja superpuestos con sitios enlazados diferencialmente entre SARM de dosis alta y R1881 de dosis baja. (B) Gráfico de volcán de sitios AR unidos diferencialmente entre dosis altas de R1881 y todos los tratamientos de SARM. (C) Gráfico de PCA que compara cistromas AR inducidos por SARM y R1881. (D) Superposición de sitios AR unidos diferencialmente para R1881 de dosis alta versus baja y R1881 de dosis alta versus SARM de dosis alta.

Los SARM inducen el reclutamiento de cofactores AR conocidos. Se ha informado que los SARM reclutan selectivamente cofactores AR para explicar los diferentes efectos que tienen los SARM en la próstata frente al tejido óseo y muscular (21, 43). Al identificar los cofactores que son compartidos o no por los andrógenos esteroides y los SARM, buscamos determinar qué factores son esenciales para los efectos supresores del crecimiento de los SARM. Usamos la plataforma Microarray Assay for Realtime Coregulator Nuclear receptor Integration (MARCoNI) para medir la unión inducida por ligando del dominio de unión del ligando AR (LBD) con el dominio de interacción de un panel de péptidos receptores nucleares inmovilizados en un soporte sólido (44) . La unión del AR LBD ligado se midió con dosis saturadas (10 μM) de SARM-2F, GFX-024, GTX-027, T8039 y Cpd26 y se comparó con el andrógeno esteroide DHT y DMSO como controles positivos y negativos, respectivamente. La DHT indujo la unión de AR-LBD a cofactores AR conocidos, incluidos NCOA1, NCOA3, PIAS2, p300 y CBP por encima del nivel de DMSO (Figura complementaria 8A). En contraste, los SARM no pudieron respaldar consistentemente estas asociaciones (Figura complementaria 8B), incluso para cofactores muy altamente enriquecidos con DHT (Figura complementaria 8C).

La falta de AR-LBD mediada por SARM y las interacciones del cofactor en el ensayo MARCoNI sugirió una limitación del ensayo MARCoNI para evaluar agonistas no esteroides, o que las interacciones del cofactor AR importantes para la actividad del SARM pueden ocurrir a través de otras regiones del AR como el N -terminal AF1 dominio o mediante otros factores intrínsecos de la célula. Además, los ensayos de unión in vitro no modelan interacciones con la mayoría de las proteínas endógenas, ni tienen en cuenta los niveles de expresión de estas proteínas. Además, otros ensayos in vitro, como los que utilizan indicadores de interacción LXXLL-AF2 o AR N- / C-terminal, predijeron mal los efectos de las moléculas esteroides SARM en las células PC (45, 46). Por esta razón, realizamos espectrometría de masas de inmunoprecipitación rápida de proteínas endógenas (RIME) para identificar proteínas en complejos AR sobre cromatina (47). Brevemente, tratamos células LNCaP con SARM-2F 5 µM o R1881 5 nM durante 4 horas. Los complejos de cromatina se aislaron, se inmunoprecipitaron con un anticuerpo AR y se analizaron por espectrometría de masas. La cuantificación de RIME identificó 321 y 249 proteínas que estaban significativamente enriquecidas con respecto a los controles de IgG en 3 réplicas de muestras tratadas con SARM-2F y R1881, respectivamente (FDR q & lt 0.05 Figura 6A). De estas, 246 proteínas se superpusieron entre SARM-2F y R1881 y se enriquecieron de manera similar en los grupos SARM-2F y R1881 (Figura 6B).

Los SARM y los andrógenos esteroides promueven interacciones análogas del cofactor AR. (A) Diagrama de Venn del número de proteínas detectadas por análisis RIME de complejos de cromatina unida a AR para LNCaP tratados con 5 μM de SARM-2F y 5 μM de R1881. FDR q & lt 0.05 (n = 3). (B) Doble el cambio de proteínas unidas a AR sobre IgG para muestras tratadas con R1881 y SARM-2F según lo detecta RIME (n = 3). (C) Intensidad de la señal de la proteína para los cofactores AR y AR involucrados en la diferenciación luminal de la próstata. (D) Factores de transcripción complejados con el AR detectado por RIME. (mi) Factores SWI / SNF detectados en complejos AR. (F) Factores de reparación y replicación del ADN en complejos AR. (CF) n = 3. Los datos representan la media ± DE.

Evaluamos las funciones conocidas de las 246 proteínas superpuestas identificadas en el análisis RIME de muestras tratadas con SARM-2F y R1881 (Figura 6A). La categoría funcional más enriquecida dentro de las proteínas compartidas por el análisis de GO fue la “proteína del metabolismo de los ácidos nucleicos” (Figura complementaria 8D). Encontramos que los cofactores AR críticos para la diferenciación luminal, incluidos HOXB13, GRHL2, UTY y NKX3-1, estaban unidos al AR en niveles similares en las muestras tratadas con SARM-2F y R1881 (Figura 6C). Tanto el SARM-2F como el R1881 indujeron al AR a asociarse con factores de transcripción y modificadores de cromatina, tanto de activación como de represión, incluidos EP300 y KDM1A (Figura 6D), miembros del complejo SWI / SNF (Figura 6E) y componentes de reparación y replicación del ADN (Figura 6F). Estos datos sugieren que tanto el AR unido a SARM-2F como al R1881 ensamblaron complejos muy similares.

Si bien estudios anteriores sugirieron que los SARM pueden impartir sus efectos selectivos de tejido al reclutar un subconjunto de cofactores y regular de manera diferencial la expresión génica (43), ninguna proteína se enriqueció significativamente en las muestras tratadas con R1881 sobre las muestras tratadas con SARM-2F o en el SARM-2F - sobre muestras tratadas con R1881 (FDR q & lt 0.05 Figura 6B y Tabla complementaria 1). Las proteínas con las diferencias más significativas entre SARM-2F y R1881 fueron MRPL19, MDH2, HBB, ACAT1 y CPSF7 (FDR q & gt 0,14). Estas proteínas no son factores de transcripción conocidos y no tienen interacciones validadas con el AR, lo que sugiere que representan interacciones inespecíficas con el anticuerpo AR o el complejo AR inmunoprecipitado.

Los efectos represores del crecimiento en PC varían según el SARM y requieren actividad AR. Además de los efectos inhibidores del crecimiento de altas concentraciones de SARM en células LNCaP (Figura 1A), determinamos que múltiples SARM también reprimieron el crecimiento de células AR-WT VCAP PC con potencias similares a las de T, alcanzando efectos de saturación en aproximadamente 10 nM (Figura 7A). SARM-2F y T8039 suprimieron el crecimiento de las células PC 22PC-EP, que albergan la mutación AR H874Y (AR H874Y) en un grado similar al observado con R1881, saturando a aproximadamente 1 nM, una concentración ligeramente más baja que los niveles de T requerido para lograr una represión del crecimiento similar (Figura 7B). Mientras que las células 22PC-EP eran muy sensibles a ENZ, la potencia relativa de ENZ era aproximadamente 100 veces menor que la de los agonistas AR T, R1881, SARM-2F y T8039 (Figura 7B).

Los SARM activan la señalización de AR y reprimen el crecimiento de PC in vitro e in vivo. (AD) Se generaron curvas de dosis-respuesta para los andrógenos esteroides R1881 y T, el antiandrógeno ENZ, los agonistas AR no esteroideos T8039, GTX-024, GTX-027 y SARM-2F para (A) VCaP, (B) 22PC-EP y (C) Líneas celulares APIPC (n = 4). Los datos representan la media ± DE. (D) Curvas de respuesta a la dosis para el inhibidor de survivina YM155 en células LNCaP con y sin SARM-2F 5 μM (n = 4). Los datos representan la media ± DE. (mi) Gráfico de volumen tumoral de LuCaP 35CR PDX tratados 5 veces por semana con vehículo (n = 10), 100 mg / kg de SARM-2F (n = 10) (P = 0,045) o 30 mg / kg de T8039 (n = 10) (P = 0.02), o con 40 mg / kg i.m. quincenales. inyecciones de T durante 28 días (n = 10) (PAG = 0,047). Los datos representan la media ± SEM. (F) Gráfico de volumen tumoral de LuCaP 96 PDX tratados 3 veces por semana con las dosis indicadas de SARM: 100 mg / kg de SARM-2F (norte = 8) (PAG = 0.04), o 30 mg / kg T8039 (norte = 5) (PAG = 0.014), o quincenalmente con i.m. inyecciones de 40 mg / kg T (norte = 7) (PAG = 0,171) o vehículo (norte = 7). Los datos representan la media ± SEM. (GRAMO) Inmunotransferencias de lisados ​​de 35CR PDX para p21, AR y MYC. Los lisados ​​se recolectaron 48 horas después de la dosificación. (H) Imágenes IHC de AR, KLK3, MYC y Ki67 en tumores 35CR PDX analizados 48 horas después de la dosificación con vehículo, 40 mg / kg T, 30 mg / kg T8039 o 100 mg / kg SARM-2F. Barra de escala: 100 μm. Ampliación original, × 20. (I) Intensidad de señal relativa para el AR por IHC (n = 4). (J) Intensidad de señal relativa para PSA por IHC (n = 4). (K) Porcentaje de núcleos positivos para MYC por IHC (n = 3). (L) Tinción positiva para Ki67 por IHC (n = 3). (I y J) Los datos representan la media ± primer y tercer rango intercuartílico. *P & lt 0.05, por ANOVA de 1 vía con la prueba de comparación múltiple de Dunnett.

En contraste con SARM-2F y T8039, GTX-024 y GTX-027 fueron ineficaces para suprimir el crecimiento de células 22PC-EP, lo que sugiere que las respuestas de SARM también pueden depender de factores celulares intrínsecos (Figura 7B). Para investigar la falta de supresión del crecimiento por GTX-024 y GTX-027 en células 22PC-EP, evaluamos la capacidad de estos SARM para influir en la expresión de genes regulados por AR FKBP5 y UGT2B17 por qRT-PCR (Figura suplementaria 9, A y B). Descubrimos que GTX-024 y GTX-027 no pudieron inducir fuertemente la expresión de FKBP5 y solo reprimieron modestamente UGT2B17 transcripciones en células 22PC-EP. Luego buscamos determinar si los compuestos GTX inducían diferencialmente la actividad AR H874Y mutante. Expresamos AR de tipo salvaje (AR WT) o AR H874Y en células PC3 sin AR y medimos FKBP5 expresión por qRT-PCR (Figura suplementaria 9, C y D). GTX-024 y GTX-027 indujeron la expresión de FKBP5 a niveles comparables a los de SARM-2F y T8039 en células PC3-AR WT. Por el contrario, GTX-024 y GTX-027 activados FKBP5 expresión en células PC3-AR H874Y en menor grado que SARM-2F y T8039. Aun así, los compuestos de GTX todavía inducían la expresión de FKBP5 aproximadamente 20 veces por encima de los niveles de control del vehículo en las células PC3-AR H874Y, lo que sugiere que otros factores también pueden desempeñar un papel en la falta de respuesta de las células 22PC-EP a los compuestos GTX.

Para evaluar si los efectos supresores del crecimiento de los SARM se debieron a su modulación de la AR en lugar de las respuestas fuera del objetivo que surgen en dosis altas, probamos los efectos de los SARM en las células LNCaP-APIPC, un derivado de LNCaP diseñado para carecer de expresión de AR (39). Los SARM, andrógenos esteroides y ENZ no influyeron en el crecimiento de esta línea celular (Figura 7C).

Hemos informado anteriormente que los andrógenos y el AR regulan positivamente la transcripción y expresión del transportador de fármacos SLC35F2 (48). Además de los sustratos naturales, SLC35F2 media el influjo celular del inhibidor de survivina (también conocido como BIRC5) YM155, lo que da como resultado la detención del crecimiento celular y la apoptosis (48). En consecuencia, el tratamiento con andrógenos proporciona un índice terapéutico para tratar las células AR-activas con YM155 mediante la regulación positiva del transportador. Determinamos que el cotratamiento de las células LNCaP con SARM-2F y YM155 redujo significativamente la viabilidad celular, cambiando el IC50 de YM155 de 40 nM sin SARM-2F a 10 nM con SARM-2F (P = 0,001 Figura 7D).

Los SARM reprimen el crecimiento de PC in vivo. Para determinar si los SARM pueden reprimir el crecimiento de PC in vivo, tratamos 2 líneas celulares de xenoinjertos de pacientes con PC (PDX) con SARM y comparamos sus efectos con T. Primero realizamos un experimento de búsqueda de dosis para confirmar que la administración oral de SARM se activaría Señalización AR. Los ratones que portaban tumores LuCaP 35CR PDX se trataron con 15 o 30 mg / kg de T8039 por vía oral, o 100 o 200 mg / kg de SARM-2F por vía oral, o 40 mg / kg de T-cipionato por vía intramuscular. inyección. Después de 48 horas, se resecaron los tumores, se extrajo el ARN y se KLK3 y FKBP5 Los niveles de transcripción se cuantificaron mediante qRT-PCR. Cada SARM aumentó sustancialmente KLK3 (Figura suplementaria 9E) y FKBP5 (Figura complementaria 9F) transcripciones en los tumores LuCaP 35CR, lo que indica que los SARM actúan como agonistas in vivo.

A continuación, evaluamos los efectos de los SARM sobre el crecimiento de LuCaP 96 PDX sensible a la castración y LuCaP 35CR PDX resistente a la castración. Después del crecimiento hasta un volumen tumoral de 150 mm 3, los ratones con tumores LuCaP 35CR se trataron 5 días a la semana con dosis orales de 30 mg / kg de T8039 o 100 mg / kg de SARM-2F, o cada 2 semanas con 40 mg / kg de T -cipionato administrado im En comparación con los controles tratados con vehículo, SARM-2F y T8039 suprimieron significativamente el crecimiento de los tumores LuCaP 35CR desarrollados en ratones castrados: después de 4 semanas de tratamiento, los volúmenes tumorales en los ratones de control promediaron 463 mm 3, mientras que los tumores en el SARM-2F– los ratones tratados promediaron 303 mm 3 (P = 0,045). Los tumores en los ratones tratados con T8039 promediaron 281 mm 3 (P = 0.02), y los tumores en ratones tratados con T promediaron 304 mm 3 (P = 0.047 Figura 7E). Los tumores LuCaP 96, cultivados en ratones macho intactos, se trataron 3 veces por semana con las mismas dosis de SARM y T. Después de 5 semanas, los tumores en los ratones tratados con vehículo promediaron 763 mm 3, mientras que los tumores de ratones tratados con SARM-2F, T8039, o T promedió 506 mm 3 (P = 0,04), 418 mm 3 (P = 0,014) y 571 mm 3 (P = 0.171) de tamaño, respectivamente (Figura 7F). La inmunotransferencia realizada en tumores LuCaP 35CR 48 horas después del tratamiento mostró una expresión reducida de MYC y AR, pero los niveles de p21 no cambiaron (Figura 7G). Las diferencias que observamos en la reducción de AR entre LNCaP y LuCaP35 pueden reflejar diferencias intrínsecas en la autorregulación de AR o la regulación de la estabilidad de la proteína AR. El análisis inmunohistoquímico confirmó que los tumores LuCAP 35CR expresaban niveles altos de la proteína AR y que la expresión de KLK3 / PSA aumentaba con el tratamiento con SARM y T (Figura 7, H – J). El tratamiento con SARM y T disminuyó la expresión de MYC nuclear (Figura 7K) y redujo el número de células positivas para Ki67 del 33% en los tumores tratados con el control del vehículo al 6% en los tumores tratados con T8039 (P & lt 0,001) y 17% en los tumores tratados con SARM-F2 (P & lt 0,001) (Figura 7L).

La señalización de AR es fundamental para el crecimiento y la supervivencia de la mayoría de los PC durante todo el curso de la enfermedad. Sin embargo, los tratamientos sucesivos con fármacos diseñados para inhibir la señalización de AR producen beneficios decrecientes y una resistencia cruzada extensa (49). SAT puede contrarrestar los mecanismos celulares adaptativos que contribuyen a un fenotipo resistente a la castración. En particular, la naturaleza dinámica de la administración de T bipolar aprovecha aún más el requisito de respuestas adaptativas para mantener proporciones óptimas de ligando y receptor que regulan la supervivencia y la proliferación celular (14). Además, los mecanismos que mejoran la función de la RA en entornos con niveles bajos de andrógenos, como Arkansas amplificación, pueden convertirse en pasivos cuando altas concentraciones de T activan las funciones supresoras del crecimiento del AR. Desafortunadamente, el uso de T como terapéutico se acompaña de limitaciones farmacológicas que impiden la evaluación óptima del agonismo de AR como estrategia de tratamiento. Por ejemplo, si el ciclo del agonismo AR alto y bajo es una faceta importante del beneficio clínico, es un desafío ajustar rápidamente las concentraciones de andrógenos plasmáticos utilizando los métodos actuales de depot i.m. inyecciones. Dadas estas consideraciones, descubrir un sustituto de T con mejor seguridad, administración y control representaría un avance significativo en el uso de terapias agonistas de AR continuas o bipolares en la clínica.

En sistemas modelo, se ha demostrado que los SARM son potentes agonistas de AR, por ejemplo, restaurando la masa corporal y muscular de ratas castradas (22). La farmacocinética de varios SARM se ha caracterizado ampliamente (19, 22, 23, 50).En términos de actividad agonista de AR, SARM-2F y GTX-024 tienen respuestas de dosis transcripcionales superponibles hacia los reporteros impulsados ​​por AR: se logró una actividad de saturación para ambos SARM a 10 –8 M (19). Se observaron respuestas transcripcionales dependientes de la dosis similares en el músculo esquelético humano primario y en las células epiteliales de la próstata (22). Si bien se ha informado de abuso de SARM y se han asociado toxicidades con productos adulterados o tergiversados ​​obtenidos a través de proveedores de Internet (51), los estudios clínicos que utilizan compuestos de SARM puros de grado clínico han demostrado excelentes perfiles de seguridad. Por ejemplo, un estudio clínico de fase II de GTX-024 (enobosarm) para la atrofia muscular inducida por cáncer no informó eventos adversos significativos (33).

Aunque las propiedades farmacológicas de los SARM están bien respaldadas por la literatura, se desconocía si los SARM, al ser agonistas parciales, activarían el AR con la suficiente potencia como para activar un programa transcripcional diferenciador y supresor del crecimiento en PC. En este estudio, probamos la hipótesis de que los SARM no esteroides coinciden con la eficacia de los agonistas AR esteroides para suprimir el crecimiento de PC resistente a la castración. Con este fin, evaluamos los SARM in vitro e in vivo para establecer sus actividades supresoras del crecimiento en modelos de PC. Al igual que los andrógenos esteroides, encontramos que los SARM inducían la expresión de genes de diferenciación luminal, bloqueaban la entrada en la fase S y reprimían los niveles de MYC y FOXM1. Finalmente, al comparar transcriptomas, cistromas AR y perfiles de cofactores AR, demostramos que los SARM recapitulaban los efectos moleculares globales de los agonistas AR esteroides.

El resultado más inesperado de este estudio fue la falta de diferencias significativas entre ciertos SARM y agonistas esteroides en las células PC. Estudios anteriores han sugerido que los SARM y los andrógenos esteroides reclutan cofactores diferencialmente (21, 43). Sin embargo, no parece haber un conjunto consistente de cofactores responsables de los efectos "androgénicos" versus los "anabólicos". Parte de esta confusión puede deberse a la gran diversidad de SARM tanto en los andamios moleculares como a la potencia de su agonismo. En nuestro estudio, encontramos que los SARM LGD-4033 y RAD140 no pudieron suprimir el crecimiento de células PC. Curiosamente, GTX-024 y GTX-027 activaron el AR lo suficiente como para suprimir el crecimiento de células LNCaP y VCAP, pero no células 22PC-EP. Estos datos sugieren que el efecto de un SARM depende del contexto intrínseco celular de la señalización AR, como Arkansas estado de mutación o amplificación, así como de las propiedades del propio SARM.

Actualmente, es difícil predecir si un SARM en particular puede activar el AR lo suficiente como para suprimir el crecimiento de la PC (45, 46). Dado que ciertos SARM se comportan como agonistas parciales in vitro y en tejidos benignos y, sin embargo, recapitulan completamente la actividad de AR en modelos de PC, el cambio de agonista parcial a agonista completo puede reflejar alteraciones genómicas y epigenómicas en carcinomas de próstata, donde la reprogramación del cistroma influye en el desarrollo de resistencia a la castración. Estos mecanismos deben estudiarse más a fondo en el contexto de la sensibilidad de SARM para predecir los respondedores probables.

En este estudio no se evaluaron los efectos de la activación de AR bipolar. La prevención de la adaptación a un entorno estático, bajo o alto en andrógenos puede ser crucial para la supresión a largo plazo del crecimiento tumoral. Comprender los cambios en la expresión génica, la fisiología y la epigenética de las células expuestas a un entorno androgénico cambiante puede ayudar a mejorar la terapia al identificar los mecanismos de retroalimentación que pueden explotarse aún más. Además, el ciclo de tratamiento actual de 28 días de BAT puede no ser el más eficaz. Dado el control que brindan las propiedades similares a las de los medicamentos de los SARM, se podrían evaluar intervalos de tratamiento más cortos o más largos para optimizar el AR bipolar para obtener el mayor efecto.

Los estudios futuros sobre el uso de agonistas no esteroides para suprimir el crecimiento de CP deberían explorar estrategias que aumenten la activación de la RA. Una vía podría ser evaluar agonistas AR completos no esteroides. A pesar de las preocupaciones sobre la seguridad, los agonistas completos pueden ser reemplazos más efectivos para los agonistas esteroides al inducir potentemente la señalización de AR, independientemente del contexto celular, y por lo tanto podrían inducir los mismos efectos sistémicos que los observados con T.Otras posibilidades incluyen enfoques coterapéuticos para activar directamente el N -Dominio terminal del AR o estabilizar los niveles de AR (52 - 54).

Nuestros hallazgos apoyan firmemente una mayor exploración de los SARM para el tratamiento de CRPC. Los compuestos no esteroideos SARM-2F, T8039, GTX-024 y Cpd26 indujeron potentemente la actividad AR, reprimieron la señalización de MYC y suprimieron el crecimiento de células PC. Los SARM se compararon favorablemente con los andrógenos esteroides al regular un conjunto de genes que se superponen en gran medida y al reclutar el mismo conjunto de cofactores AR para la cromatina. Dado que los SARM ya se han probado en una variedad de entornos clínicos para otras afecciones de salud, el camino para implementarlos en la clínica como una terapia de CRPC podría acelerarse. Dado su modo conveniente de administración, perfil de seguridad favorable y potencial para mejorar la salud general, los SARM presentan una opción terapéutica atractiva.

Cultivos celulares in vitro. Las células LNCaP se obtuvieron de la American Type Culture Collection (ATCC) (CRL-1740) y se cultivaron en RPMI-1640 (sin rojo de fenol) (Gibco, Thermo Fisher Scientific, catálogo 11835030), suplemento con FBS al 10% (Gibco, Thermo Fisher Scientific , catálogo 10437-02). Las células VCAP se obtuvieron de ATCC (CRL-2876) y se cultivaron en DMEM / F12 (sin rojo fenol) (Gibco, Thermo Fisher Scientific, catálogo 21041025) con FBS al 10%. Las células PC-3 también se obtuvieron de ATCC (CRL-1435) y se cultivaron en DMEM / F12 (sin rojo de fenol) (Gibco, Thermo Fisher Scientific, catálogo 21041025) con FBS al 10%. 22PC-EP, un obsequio del laboratorio de Charles Sawyers en el Memorial Sloan Kettering Cancer Center (Nueva York, Nueva York, EE. UU.), Se cultivaron en RPMI-1640 y FBS al 10%. Los cultivos se mantuvieron en un 5% de CO2 incubadora a 37 ° C. Las células se analizaron para detectar micoplasmas y fueron validadas por el Centro de diagnóstico de ADN (DDC) (Fairfield, Ohio, EE. UU.) Y se utilizaron dentro de los 20 pasajes posteriores a su recepción.

Ensayos de dosis-respuesta. Las células se sembraron en placas a 5000 células por pocillo en placas recubiertas de cultivo de tejidos de paredes negras (Corning, catálogo 3764BC) en medio de crecimiento normal. Las células se incubaron con un rango de dosis de fármacos disueltos en medio (n = 4) hasta un volumen final de 100 μL por pocillo. Después de 4 días, se agregaron 30 μL / pocillo de Celltiter-Glo (Promega, catálogo G7572) y se midió la luminiscencia en un lector de microplacas Synergy H1 (BioTek). En el estudio se utilizaron los siguientes fármacos: enzalutamida (Selleckchem, catálogo S1250) GTX-024 (Selleckchem, catálogo MK-2866) GTX-027 (un obsequio de James Dalton, Universidad de Michigan, Ann Arbor, Michigan, EE. UU.) SARM- 2F y T8039 (2-cloro-4 - [(2S, 3S) -3-hidroxi-2- (trifluoroetil) -5-oxopirrolidin-1-il] benzonitrilo obsequios de Takeda, Kanagawa, Japón) Cpd26 (obsequio de Novartis , Basilea, Suiza) RAD-140 (Selleckchem, catálogo S5275) LGD-4033 (Selleckchem, catálogo S8822) YM155 (Selleckchem, catálogo S1130) y R1881 (PerkinElmer, catálogo NLP005005mg).

qRT-PCR. Las células (1 x 10 6) se sembraron en placas de 6 pocillos en medio de crecimiento normal, y después de 24 horas, las células se dosificaron a los niveles indicados y se cultivaron durante 48 horas. A continuación, se recogieron las células usando un kit RNeasy (QIAGEN, catálogo 74104). El ADNc se preparó usando SuperScript II (Thermo Fisher Scientific, catálogo 18064014). Los niveles de expresión se midieron usando Power Sybr Green (Applied Biosystems, catálogo 4367659) y en un sistema Bio-Rad CFX384 en tiempo real. Los cebadores utilizados se enumeran en la Tabla complementaria 2.

RNA-Seq. El ARN se extrajo como se describió anteriormente. El ARN (1 μg) se procesó en una biblioteca usando el kit de preparación de muestras TruSeq Stranded mRNA LT (Illumina). Las bibliotecas se secuenciaron utilizando HiSeq 2500 (Illumina) con lecturas de extremos emparejados de 50 pb. Las lecturas se mapearon y alinearon con el genoma humano hg38 usando TopHat, versión 2 (55). Los genes expresados ​​diferencialmente se determinaron usando GenomicAlignments (56) y edgeR (57). Se utilizó un límite de expresión génica de 1 recuento por millón en al menos 2 muestras. El análisis de la ruta se realizó utilizando GSEA (58) y GSVA (59).

Análisis del ciclo celular. Las células (1 x 10 6) se sembraron en placas de 6 pocillos y se cultivaron durante 48 horas con los fármacos indicados. El análisis del ciclo celular se realizó utilizando un kit de ensayo de citometría de flujo Click-iT EdU Alexa Fluor 488 (Thermo Fisher Scientific, catálogo C10420) como marcador de fase S y tinción FxCycle Violet (Thermo Fisher Scientific, catálogo F10347) como tinción de contenido de ADN .

Inmunotransferencia e IHC. Los lisados ​​se procesaron en geles NuPAGE 4% -12% Bis-Tris (Thermo Fisher Scientific, catálogo NP0321) en tampón MOPS (Thermo Fisher Scientific, catálogo NP0001). Las proteínas se unieron a membranas de nitrocelulosa (Thermo Fisher Scientific, catálogo LC2000) en tampón de transferencia NuPAGE (Thermo Fisher Scientific, catálogo NP0006) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se utilizaron los siguientes anticuerpos de Cell Signaling Technology: GAPDH (catálogo 2118L) γ-H2AX (catálogo 9718T) c-Myc (catálogo 13987s) p16 (catálogo 92803s) p21 (catálogo 2947s) y FOXM1 (catálogo 5436s). Las inmunotransferencias sin cortar se pueden ver en el material complementario en línea. La IHC se realizó como se describió anteriormente (39). La IHC automatizada se realizó utilizando un instrumento DISCOVERY ULTRA (Ventana Medical Systems). Se cortaron secciones de tejido con un grosor de 4 µm y se montaron sobre portaobjetos cargados positivamente. La desparafinización a bordo se realizó usando DISCOVERY Wash Buffer (Ventana, catálogo 950-510) seguido de recuperación de epítopo inducida por calor con solución DISCOVERY CC1 (Ventana, catálogo 950-224). Las secciones se incubaron con los siguientes anticuerpos monoclonales primarios: AR (Cell Signaling Technology, D6F11) a 1: 100 c-MYC (Abcam, Y69) a 1:50 PSA (Leica, 35h9) a 1:50 o Ki67 (Thermo Fisher Scientific, SP6) a 1: 100. Los portaobjetos de PSA y Ki67 se incubaron con IgG anti-ratón (Abcam, M111-2) a 1: 200 antes de la aplicación de los anticuerpos secundarios. Todos los portaobjetos se incubaron con el anticuerpo secundario en un sistema DISCOVERY anti-conejo HQ-HRP (Ventana, catálogo 760-4820). La señal de c-Myc se amplificó aún más utilizando el kit DISCOVERY AMP (Ventana, catálogo 760-052). Los anticuerpos se detectaron con un kit de detección ChromoMap DAB (Ventana, catálogo 760-159). Las secciones se tiñeron por contraste usando Hematoxilina II (Ventana, catálogo 790-2208), seguido de Reactivo Bluing (Ventana, catálogo 760-2037). Los portaobjetos se escanearon utilizando el instrumento Ventana DP 200 (Ventana Medical Systems).

CUT & ampRUN. CUT & ampRUN se realizó en 5 x 105 células LNCaP cultivadas durante 4 horas en el tratamiento especificado después de cultivarlas durante 48 horas en RPMI-1640 con suero despojado de carbón al 10% (Thermo Fisher Scientific, catálogo SH3006803). Cada condición se realizó por duplicado. Las células se procesaron como se describió previamente (60) usando pAG-mnasa y el protocolo bajo en sal con el anticuerpo AR (MilliporeSigma, catálogo 06-680). Las bibliotecas de secuenciación se prepararon usando un kit de preparación de bibliotecas MicroPlex, versión 2 (Diagenode, catálogo C05010014) y se secuenciaron usando el Illumina HiSeq 2500 en modo de ejecución rápida con lecturas de extremos emparejados de 50 pb. Las lecturas se alinearon con el genoma de hg19 usando Bowtie 2 (61). Los picos se llamaron utilizando MACS2 (62). Las anotaciones genéticas se realizaron utilizando HOMER (63) y el paquete ChIPSeeker R (64). Los picos unidos diferencialmente se determinaron usando el paquete DiffBind R (65). Los picos se visualizaron usando IGV (66). Se utilizó DeepTools 3.3.0 para calcular matrices y trazar mapas de calor para los sitios de unión (67).

Ensayo MARCoNI. El ensayo MARCoNI fue realizado por PamGene International. Las dosis de saturación (10 μM) de ligandos se compararon con DHT y DMSO utilizando la matriz de 154 correguladores PamChip (PamGene, catálogo 88101) y el AR LBD (LBD-GST, Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, catálogo A15675). Cada compuesto se probó con 3 réplicas en modo agonista frente a disolvente (DMSO al 2%).

ESCARCHA. Las células LNCaP se cultivaron durante 48 horas en medio de suero despojado de carbón al 10% y luego se incubaron durante 4 horas con 5 µM de SARM-2F o 5 nM de R1881. Las células se fijaron, permeabilizaron e inmunoprecipitaron como se publicó anteriormente (47). Los extractos se sometieron a ultrasonidos usando un sonicador Covaris M220. La cromatina se inmunoprecipitó usando una mezcla 1: 1 de los anticuerpos AR (MilliporeSigma, catálogo 06-680) y AR (Active Motif, catálogo 39781). Los datos se analizaron utilizando Proteome Discover (Thermo Fisher Scientific). Los resultados se filtraron adicionalmente utilizando el depósito CRAPome para eliminar las 250 proteínas superiores unidas a GFP en 293 células (68). Las proteínas ribosómicas e histonas también se eliminaron del análisis. Las listas de genes identificadas por espectrometría de masas se anotaron usando Panther GO (69).

Experimentos de xenoinjertos derivados de pacientes. Se implantaron ratones NOD / SCID γ (NSG) (The Jackson Laboratory, 005557), de 6 a 8 semanas de edad, s.c. con LuCaP 35CR o LuCaP 96 PC PDX para producir de 8 a 10 tumores evaluables por brazo de tratamiento. LuCaP 35CR y LuCaP 96 son, respectivamente, modelos PC PDX resistentes a la castración y sensibles a la castración que expresan el WT AR que fueron establecidos por el Biorepositorio Genitourinario del Centro Médico de la Universidad de Washington (UWMC) como se describió anteriormente (70). Los ratones que recibieron LuCaP 35CR se castraron 2 semanas antes de la implantación con piezas tumorales. Los tumores se midieron 3 veces por semana y el volumen del tumor se calculó como: longitud x (ancho 2) / 2. Cuando los tumores alcanzaron los 150 mm 3, los ratones se asignaron al azar al vehículo (metilcelulosa al 0,5%) o al tratamiento (30 mg / kg de T8039 5 × / semana por vía oral, 100 mg / kg de SARM-2F 5 × / semana por vía oral o 40 mg / kg de T -cipionato mediante inyección intramuscular quincenal) brazos. Los ratones se controlaron hasta que los tumores alcanzaron un tamaño de aproximadamente 1000 mm 3 (final del estudio [EOS]), momento en el que los ratones se sacrificaron de acuerdo con los protocolos institucionales y se recolectaron los tumores para su análisis.

Estadísticas. Para los experimentos de RNA-Seq, FDR q Se generaron valores de genes diferenciales y expresión de conjuntos de genes utilizando algoritmos para edgeR y GSEA, respectivamente. Los datos de RIME se procesaron utilizando algoritmos internos de Proteome Discover. Los puntos de datos del ensayo MARCoNI se compararon utilizando el método de Student t prueba. Motivo CUT & ampRUN PAG y q Los valores (Benjamini) se generaron utilizando HOMER y FDR de unión diferencial q valores usando algoritmos internos a DiffBind. Los datos de qRT-PCR se compararon usando ANOVA de 1 vía con la prueba de comparación múltiple de Dunnett en valores de cambio de veces calculados usando el método ΔΔCt. Para ensayos de crecimiento, evaluación de IC50 y las sinergias de fármacos se realizaron utilizando la suma de cuadrados extra F prueba en GraphPad Prism 8 (software GraphPad). Los puntos de dosis individuales se evaluaron utilizando las t prueba. Los puntos de dosis para los ensayos de crecimiento in vivo se evaluaron utilizando ANOVA de 1 vía con la prueba de comparación múltiple de Dunnett. La significancia para el análisis de IHC se calculó usando ANOVA de 1 vía con la prueba de comparación múltiple de Dunnett. La significancia para los análisis del ciclo celular se calculó usando ANOVA de 1 vía con la prueba de comparación múltiple de Sidak en GraphPad Prism 8.0.1.

Aprobación del estudio. Todos los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con los protocolos aprobados por el IACUC del Fred Hutchinson Cancer Research Center y siguiendo las recomendaciones de los NIH Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio (Prensa de las Academias Nacionales, 2011). Este estudio no involucró a sujetos humanos.

MDN y PSN diseñaron el estudio y redactaron el manuscrito. SRP proporcionó comentarios sobre el diseño del estudio y experiencia en AR. MPM, DHJ y NDS proporcionaron orientación técnica para los ensayos CUT y ampRUN. RD y TH realizaron tinción e imagenología IHC. MCH proporcionó orientación de IHC, realizó análisis de IHC y brindó orientación sobre el diseño de RIME. Un Corella, MDN e IMC contribuyeron al análisis de RNA-Seq. Un Corella, LB y MDN realizaron RIME. CP y MDN realizaron ensayos de crecimiento. HM, AB y MDN realizaron experimentos de qRT-PCR. SBF proporcionó orientación sobre el análisis del ciclo celular. JTD proporcionó experiencia en GTX-027 y SARM. EAM proporcionó orientación sobre el diseño de experimentos PDX, orientación sobre el diseño del estudio y comentarios sobre el manuscrito. EC generó las líneas celulares PDX. LA y A Christiani realizaron experimentos PDX.

Agradecemos a Steve Balk, Henry Long, Myles Brown y a los miembros del laboratorio Nelson por sus útiles consejos y críticas. Agradecemos a Hansjoerg Keller de Novartis por proporcionar Cpd26 y Atsushi Hasuoka, Katsuji Aikawa, Megumi Morimoto y Takahito Hara de Takeda Pharmaceutical Company Ltd. por proporcionar SARM-2F y T8039. Agradecemos a Steven Henikoff por proporcionar la enzima pAG-MNasa para los estudios CUT y ampRUN. Agradecemos el apoyo a la investigación de los NIH (R21CA230138, P30CA015704-40, P50CA097186, P01CA163227 y R01 CA234715) un premio del Programa de Investigación Médica Dirigido por el Congreso (CDMRP) (PC170431) de la Fundación del Cáncer de Próstata y el Instituto de Investigación del Cáncer de Próstata. El resumen gráfico fue creado en BioRender.

Conflicto de intereses: JTD informa recibir pagos de regalías relacionados con patentes para el desarrollo de SARM y distribuciones de regalías de la Fundación de Investigación de la Universidad de Tennessee relacionadas con patentes de SARM (EE. UU. 2019/0055192 A1). PSN se ha desempeñado como asesor de Astellas Pharma, Janssen Pharmaceuticals y Bristol Myers Squibb.


Abstracto

La disminución de los esteroides sexuales, testosterona y estrógeno, está asociada con un mayor riesgo de enfermedad de Alzheimer. La suplementación con testosterona y estrógeno mejora los déficits cognitivos en modelos animales de la enfermedad de Alzheimer. Las hormonas sexuales intervienen en la regulación del β-amiloide mediante la inducción de las enzimas que degradan el amiloide-β, la neprilisina y la enzima que degrada la insulina. Para imitar el efecto de la dihidrotestosterona (DHT), administramos un agonista selectivo del receptor de andrógenos, ACP-105, solo y en combinación con el agonista selectivo del receptor de estrógeno β (ERβ) AC-186 a ratones machos transgénicos triples gonadectomizados. Evaluamos la memoria espacial a largo plazo en el laberinto de agua de Morris, la locomoción espontánea y el comportamiento similar a la ansiedad en el campo abierto y en el laberinto de más elevado. Descubrimos que el ACP-105 administrado solo disminuye el comportamiento similar a la ansiedad. Además, cuando se administra ACP-105 en combinación con AC-186, aumentan las enzimas que degradan el amiloide-β, la neprilisina y la enzima que degrada la insulina, y disminuyen los niveles de amiloide-β en el cerebro y mejoran la cognición. Curiosamente, el nivel del receptor de andrógenos en el cerebro aumentó con el tratamiento crónico con el mismo tratamiento combinado, ACP-105 y AC-186, que no se observó con DHT o ACP-105 solos. Con base en estos resultados, el efecto beneficioso del agonista selectivo de ERβ como potencial terapéutico para la enfermedad de Alzheimer merece una mayor investigación.


Discusión

El AR, como la mayoría de los receptores nucleares, se une a miles de sitios cromosómicos pero solo regula cientos de genes [24, 41, 42]. Por lo tanto, la mayoría de los promotores de genes regulados por AR interactúan físicamente con múltiples ARBS [7].Sin embargo, no se comprende bien cómo estos sitios de unión trabajan juntos para inducir la transcripción, ya que la anotación de CRE no codificantes ha sido un desafío. Si bien los enfoques descriptivos, incluida la histona ChIPseq o GROseq, se correlacionan en gran medida con la actividad potenciadora, no pueden proporcionar la resolución específica del locus que se necesita para comprender estas complejas interacciones. Para anotar estas regiones individuales, probamos sistemáticamente la actividad potenciadora de todos los ARBS clínicos que ocurren comúnmente utilizando un STARRseq optimizado [26]. A partir de esto, encontramos que solo una fracción de ARBS (7%) mostró actividad potenciadora dependiente de andrógenos, mientras que la mayoría (81%) estaban inactivos. Esto es análogo al trabajo en células madre donde sólo un pequeño porcentaje de CRE marcados con NANOG, OCT4, H3K27ac y H3K4me1 resultaron ser potenciadores activos [43, 44]. Sin embargo, como probamos solo un punto de tiempo, en un esfuerzo por limitar el impacto de la DEG inducida por andrógenos en la actividad de AR, es posible que pueda haber una actividad diferente en ARBS en puntos de tiempo posteriores. Sin embargo, los resultados de este ensayo basado en plásmidos se correlacionan fuertemente con las características epigenéticas tanto en las líneas celulares de CaP como en los tumores clínicos, lo que sugiere que la capacidad potenciadora de la CRE individual es predictiva de la actividad potenciadora de AR en estado estacionario in situ (Figuras 1e y 2b). ). En pacientes emparejados antes y después del tratamiento con ENZA, observamos que H3K27ac en potenciadores inactivos y constitutivos generalmente no se vio afectado por la inhibición de AR, mientras que los potenciadores inducibles tuvieron una marcada disminución después del tratamiento con ENZA. Apoyando estos resultados, en una población de pacientes más grande de CaP primario, H3K27ac se enriqueció significativamente en potenciadores tanto inducidos como constitutivamente activos en comparación con ARBS inactivo (Fig. 2a). Sin embargo, estos resultados descriptivos de ChIPseq solo se correlacionan ampliamente con la actividad potenciadora de AR (Fig. 1g). No pueden anotar CRE individuales y proporcionar la resolución necesaria para caracterizar interacciones proteicas complejas, identificar mutaciones no codificantes o delinear la lógica reguladora subyacente de la transcripción mediada por AR. Al probar sistemáticamente todos los ARBS clínicos para determinar la actividad potenciadora, esto proporciona un "mapa" detallado necesario para investigar estos problemas clínicamente importantes.

Usando esta anotación funcional, luego caracterizamos qué características se correlacionan con los potenciadores activos. Inicialmente interrogamos motivos de ADN en cada clase de potenciador AR, pero esto proporcionó casi ningún poder predictivo ya que los motivos ARE se distribuyeron por igual entre potenciadores inducibles, inactivos y constitutivos (archivo adicional 1: Fig. S7). Esto contrasta con el trabajo con los receptores de glucocorticoides que sugirió que los elementos de respuesta a los esteroides tenían más probabilidades de encontrarse en los potenciadores activos [24]. Potencialmente, esto puede deberse al tamaño más grande del ARBS probado, ya que muchos motivos se encontrarán aleatoriamente en los fragmentos grandes (& gt 500 pb) usados ​​en nuestra biblioteca STARRseq. Sin embargo, aunque los motivos de ADN no estratificaron las CRE potenciadoras, muchas características genómicas se correlacionaron con la actividad potenciadora mediada por andrógenos. Ampliamos nuestro análisis y entrenamos a un clasificador de aprendizaje automático para predecir las clases de potenciadores de todos los estudios de ChIPseq disponibles públicamente en LNCaP. Usando este modelo, pudimos predecir de manera robusta los potenciadores inducibles con una tasa de recuperación 10 veces mayor que la ARBS aleatoria. Es importante destacar que validamos experimentalmente estas anotaciones predichas y descubrimos que nuestro modelo podría identificar con éxito aquellas regiones que probablemente sean potenciadores de AR inducibles a una tasa similar a nuestro conjunto de prueba (Fig. 3b). Usando este clasificador, identificamos aquellas características que eran predictivas de la actividad potenciadora de AR (Fig. 3a). A partir de esto, encontramos que los potenciadores inducibles se asocian fuertemente con ambas características asociadas con el potenciador AR, incluyendo H3K27ac y MED1, y coactivadores como PIAS1 y ARID1A [6, 45]. Como este clasificador es predictivo de potenciadores inducibles por andrógenos, no puede identificar aquellas características que son críticas, pero que se encuentran ampliamente, en muchos ARBS como FOXA1. Cuando cada característica de este modelo más grande se muestreó sistemáticamente, descubrimos que la altura del pico AR podría identificar los potenciadores inducibles en ARBS mejor, aunque no tan bien como nuestro modelo completo, que cualquier característica individual, incluido H3K27ac (Fig. 3c). Sin embargo, la actividad del potenciador no se debe únicamente a la unión de AR, ya que muchos ARBS inactivos (196/2479) tienen una altura máxima de AR mayor que los potenciadores inducibles medianos.

Habiendo anotado los diferentes potenciadores de AR, luego caracterizamos cómo cada clase impactaba la transcripción de genes. Encontramos que los potenciadores inducibles tenían más probabilidades que los potenciadores inactivos o constitutivos de interactuar con otros ARBS o TSS de genes regulados por andrógenos (Fig. 4a, b, e). Además, los potenciadores inducibles tenían el mayor número de contactos cromosómicos de todos los ARBS y eran centrales en las redes de interacción AR CRE (Fig. 4c, f). Para probar su papel en la transcripción, desactivamos funcionalmente cada clase de potenciadores de AR (Fig. 4g). Apoyando su papel central, todos los potenciadores inducibles probados contribuyeron fuertemente a la transcripción mediada por AR. Sorprendentemente, la transcripción no dependía únicamente de potenciadores inducibles y observamos que la inhibición de ARBS constitutivos o inactivos específicos también reducía la transcripción inducida por andrógenos. Es poco probable que esto sea un artefacto del ensayo STARRseq, ya que las anotaciones se correlacionan fuertemente con las características del potenciador tanto in vitro como in vivo.. Si bien no podemos descartar que estas regiones tengan actividad potenciadora en un contexto celular o punto de tiempo diferente, nuestros resultados sugieren que múltiples ARBS CRE trabajan en conjunto para impulsar la transcripción de genes. En apoyo de este modelo, observamos que aquellos potenciadores inducibles que interactúan con ARBS adicionales tienen una mayor expresión génica inducida por andrógenos que aquellos que no lo hacen (Fig. 4h). Además, encontramos que los potenciadores de AR inducibles, inactivos y constitutivos tenían una conservación evolutiva similar (Fig. 4i). Es poco probable que los potenciadores inactivos o constitutivos se conserven, dadas las altas tasas de deriva genética en el genoma no codificante, si no tuvieran una función crítica en la transcripción de genes. Este modelo de actividad propuesto no es exclusivo de AR y se ha observado un fenotipo similar con varios otros factores de transcripción. Un trabajo reciente en el que se utilizó CRISPRi para eliminar los sitios de unión a los receptores de estrógenos individuales demostró interacciones jerárquicas o sinérgicas entre los potenciadores de la expresión génica [46]. Además, el trabajo con el receptor de antígeno mostró que se requieren potenciadores tanto activos como inactivos para la expresión génica [47]. Curiosamente, esto sugiere que la actividad potenciadora no es la única característica requerida para la transcripción mediada por AR. Si bien son especulativos, estos ARBS inactivos pueden trabajar en conjunto con potenciadores inducidos para aumentar la concentración de proteína local y potencialmente impulsar la formación de condensados ​​de fase biológica que se han observado con otros receptores nucleares en potenciadores fuertemente activos [48]. Respaldando este modelo, observamos que la unión de AR a potenciadores inducibles aumentó significativamente la co-accesibilidad entre ARBS (Fig. 5f), lo que hace que los potenciadores de AR inducibles estén en estrecha proximidad física a múltiples ARBS (Fig. 4c). No se comprende bien cómo se producen estas interacciones y hay pruebas contradictorias de que la unión del factor de transcripción puede inducir nuevos bucles de cromatina o estabilizar las interacciones establecidas [34, 49]. Independientemente del mecanismo, está claro que los potenciadores inducibles funcionan con otros AR CRE para impulsar la transcripción de genes mediada por AR.

Nosotros y otros hemos demostrado previamente que los ARBS están altamente mutados en el CaP primario [22, 23]. Dado el papel crítico de AR en el CaP, especulamos que estas mutaciones somáticas podrían alterar potencialmente la actividad transcripcional del tumor y potencialmente impactar el crecimiento y la proliferación del CaP. Sin embargo, la selección de mutaciones no codificantes para la validación experimental es un desafío debido tanto al gran número de ARBS y SNV como a la frecuencia relativamente baja de mutaciones recurrentes en CRE [50]. Para agravar aún más este problema, las mutaciones en múltiples CRE también pueden afectar la expresión génica causando el mismo fenotipo con diferentes mutaciones [51]. Sin embargo, aunque es difícil de identificar, las mutaciones somáticas no codificantes pueden desempeñar un papel fundamental en la progresión de la enfermedad por CaP [19,20,21]. Mediante el uso de nuestra anotación de potenciador funcional para "mapear" CRE específicos que probablemente afecten la transcripción mediada por andrógenos, estratificamos las mutaciones somáticas potenciales para las pruebas. Centrándonos en los potenciadores de RA inducibles, demostramos que el 19% de los SNV probaron una actividad potenciadora significativamente alterada (3/16 Fig. 6b). Esto es significativamente más alto que un estudio reciente que utilizó una MPRA ortogonal de sitios H3K27ac que mostró un 1,8% de los SNV de PCa primarios que afectan la actividad potenciadora [23]. Esta diferencia podría deberse a problemas técnicos relacionados con el tamaño del inserto (146 frente a & gt 500 pb), las regiones genómicas específicas probadas (H3K27ac frente a ARBS inducible), la etapa de progresión del CaP (primario frente a mCRPC) y la relativamente pequeña número de regiones genómicas probadas (norte = 16). De particular interés, identificamos una mutación somática en el CaP metastásico que redujo significativamente la actividad de un potenciador crítico de AR requerido para la expresión de ZBTB16 (Figura 6d). Este gen regulado por andrógenos es un supresor de tumores bien caracterizado que con frecuencia está mutado en el CaP en estadio tardío [39, 52]. La tinción inmunohistoquímica mostró una reducción significativa de ZBTB16 en muestras de CaP localizado de alto grado y expresión débil o nula en biopsias de CaP metastásico [53]. ZBTB16 Los experimentos de derribo demostraron un aumento del crecimiento de CaP [39] y la expresión ectópica inhibió la tumorigénesis del cáncer de próstata en modelos de ratón [54]. Además, la pérdida de ZBTB16 promueve un fenotipo metastásico y resistente a ENZA en las células de cáncer de próstata [39]. Dada tal función represiva, homocigotos ZBTB16 Se ha encontrado que las mutaciones ocurren en el 4-9% de los tumores CPRC [40, 55, 56]. Si bien estas mutaciones ocurren en regiones codificantes de proteínas, nuestro estudio demuestra que las mutaciones somáticas en el potenciador de AR también pueden reducir ZBTB16 expresión.

En conclusión, hemos creado el primer mapa funcional de la actividad potenciadora potencial de AR. Al cuantificar la actividad de cada ARBS, esto proporciona una visión mecanicista de la regulación de genes de mamíferos. Juntos, nuestros datos demuestran que los potenciadores inducibles impulsados ​​por AR actúan como un centro regulador que frecuentemente coopera con otros ARBS para impulsar la transcripción. La identificación de potenciadores clave se puede utilizar para estratificar mutaciones no codificantes para pruebas funcionales. Estos resultados se han integrado en una aplicación web fácil de usar que se puede buscar por genes o coordenadas genómicas (https://lacklab.shinyapps.io/LSSHL/).


Abstracto

La disminución de los esteroides sexuales, testosterona y estrógeno, está asociada con un mayor riesgo de enfermedad de Alzheimer. La suplementación con testosterona y estrógeno mejora los déficits cognitivos en modelos animales de la enfermedad de Alzheimer. Las hormonas sexuales intervienen en la regulación del β-amiloide mediante la inducción de las enzimas que degradan el amiloide-β, la neprilisina y la enzima que degrada la insulina. Para imitar el efecto de la dihidrotestosterona (DHT), administramos un agonista selectivo del receptor de andrógenos, ACP-105, solo y en combinación con el agonista selectivo del receptor de estrógeno β (ERβ) AC-186 a ratones machos transgénicos triples gonadectomizados. Evaluamos la memoria espacial a largo plazo en el laberinto de agua de Morris, la locomoción espontánea y el comportamiento similar a la ansiedad en el campo abierto y en el laberinto de más elevado. Descubrimos que el ACP-105 administrado solo disminuye el comportamiento similar a la ansiedad. Además, cuando se administra ACP-105 en combinación con AC-186, aumentan las enzimas que degradan el amiloide-β, la neprilisina y la enzima que degrada la insulina, y disminuyen los niveles de amiloide-β en el cerebro y mejoran la cognición. Curiosamente, el nivel del receptor de andrógenos en el cerebro aumentó con el tratamiento crónico con el mismo tratamiento combinado, ACP-105 y AC-186, que no se observó con DHT o ACP-105 solos. Con base en estos resultados, el efecto beneficioso del agonista selectivo de ERβ como potencial terapéutico para la enfermedad de Alzheimer merece una mayor investigación.


SARM & # 8211 ¿Qué son?

Los SARM son moduladores selectivos del receptor de andrógenos que actualmente se consideran más seguros y menos tóxicos que los esteroides anabólicos.

En cuanto al tipo, los SARM se dividen en 2 categorías principales, una que es ESTEROIDAL y la segunda es NO ESTEROIDALES.

  • Los SARM ESTEROIDALES se descubrieron hace unos 70 años sin ningún uso para las condiciones humanas, excepto para aquellos con necesidades extremas. Estos SARM también se consideran obsoletos por ahora.
  • Los SARM ESTEROIDALES son los que se unen a los receptores animales y humanos, especialmente en los huesos y el receptor muscular, donde luego crean el efecto anabólico.

Tipos de SARM, beneficios y vida media

Hay muchos tipos de SARM, algunos están relacionados con la categoría exacta de SARM, mientras que otros solo comparten un mecanismo muy común.

En general, describiremos de 8 a 9 tipos de SARM que actualmente se utilizan para mejorar el rendimiento y otras múltiples razones.

Estos compuestos relacionados con los SARM están demostrando ser una poderosa alternativa a los esteroides anabólicos en muchos estados.

Los SARM utilizados por los culturistas son atletas actualmente son:

  1. Testolona (RAD-140)
  2. Cardarine (GW-501516)
  3. Ligandrol (LGD-4033)
  4. Ostarine (MK-2866)
  5. Andarine (S4)
  6. Miostatina (YK-11)
  7. GTX S-23
  8. Nutrobal (MK-677)
  9. Stenabolic (SR-9009)

La revisión detallada de los SARM lo ayudará a conocer la diferencia entre sus tipos y lo ayudará a elegir el más adecuado para usted. [2]

Hay lugares donde puede comprar SARM a un precio rentable y esos son SARM 100% reales.

1) Testolona

También conocido como RAD-140 por su estructura química, Testolone es uno de los SARM más poderosos disponibles en la actualidad.

Testolone puede afectar la ganancia de masa incluso en dosis más pequeñas y desarrollar una forma corporal enorme en poco tiempo.

La compañía detrás de la fabricación de Testolone SARM es Radius Health, que lo está formulando para afecciones médicas como:

  • Cáncer de mama
  • Enfermedad de desgaste muscular
  • Alternativa a la terapia de reemplazo de testosterona (TRT)

El mecanismo de RAD-140 establece la orientación de los receptores de andrógenos del tejido esquelético y que promueve la generación de masa muscular magra.

Testolone también se considera el más puro de todos los SARM a pesar de que su potencia es del 10% la de la testosterona.

Testoline Half-Life: 20-24 horas

2) Cardarine (GW-501516)

Al principio, Cardarine se diseñó para tratar ciertas enfermedades cardiovasculares y otras afecciones médicas como la diabetes tipo II, la obesidad y otros trastornos metabólicos.

El uso de Cardarine está fuertemente asociado con la reducción del nivel de colesterol por el que se ofrece a los atletas para un rendimiento máximo.

Cardarine es en parte SARM y parte de ella pertenece a la clase PPAR. Estos son agonistas de receptores activados por proliferadores de peroxisomas, que son diferentes de los SARMS.

No se unen a los receptores de andrógenos ni crean ningún efecto anabólico, mientras que el nivel de testosterona permanece intacto cuando se usa Cardarine y ciertos tipos de PPAR. El único uso de ellos es para tratar los síndromes metabólicos y la unión con el azúcar en sangre y los triglicéridos.

Cuando piensas en los SARM de desarrollo muscular, Cardarine no es el que brilla más bellamente.

Sí, para los objetivos de mejora del rendimiento, no hay nada mejor que Cardarine y sus precursores.

Vida media de Cardarine: 16-24 horas

3) Ligandrol (LGD-4033)

Ligandrol es el tipo de SARM que los hombres están usando para obtener una ganancia de masa excesiva y una ganancia de tamaño a granel.

En ensayos clínicos en humanos, se descubrió que Ligandrol es el SARM de construcción muscular más intimidante que aumenta el volumen sin aumentar la grasa.

Esto lo hace menos o nada tóxico para la salud cardiovascular, lo que funciona positivamente.

Muchos de los estudios realizados sobre Ligandrol se centran en su uso potencial contra la enfermedad de desgaste muscular transmitida por la edad, el cáncer y la osteoporosis, donde el uso de LGD-4033 podría desempeñar un papel importante, pero quién sabe.

Vida media de Ligandrol: 24-36 horas

4) Ostarine (MK-2866)

Ostarine, al igual que otros SARM, es el producto químico de investigación que está diseñado actualmente para tratar la osteoporosis y la enfermedad de desgaste muscular.

Es conocido por muchos nombres como Ostabolic, Enobosarm, pero nos quedaríamos con el MK-2866.

El uso de Ostarine es atractivo para muchos atletas, ya que el compuesto se centra principalmente en la mejora del rendimiento e induce el estado anti-catabólico en el cuerpo humano.

Aquí es donde su cuerpo no pierde masa muscular magra y este es uno de los mayores efectos de Ostarine.

Ostarine, como todos los SARM, se une a los receptores de andrógenos selectivos ubicados en los músculos y los tejidos óseos. Es el SARM ideal para la ganancia de masa muscular y la reducción de grasa, mientras que los efectos de ganancia de masa son potencialmente mayores que los de los esteroides anabólicos.

Ofrece alivio de los efectos secundarios de los esteroides anabólicos con el mismo tipo de resultados que aparecen en poco tiempo.

Vida media de Ostarine: 24 horas

5) Andarine (S4)

Andarine ha sido utilizado por numerosos atletas en todo el mundo para múltiples objetivos.

Se puede decir sobre este SARM que es un misterio para muchos expertos, ya que el compuesto no se está investigando y, para ser honesto, muchas publicaciones al respecto ni siquiera se publicaron.

Sin embargo, Andarine ejerce los efectos anabólicos y androgénicos más fuertes.

Vida media andarina: 3-4 horas

6) YK-11 (miostatina)

La miostatina es el SARM más fuerte disponible para usted en estos días, algunas personas creen que es lo más cercano a los esteroides anabólicos donde no es el esteroide real.

YK-11 es un SARM esteroideo que fue diseñado para modular la hormona DHT, este efecto es como el efecto de los esteroides anabólicos y por ello se considera que la miostatina es la más cercana a los esteroides anabólicos.

Como muchos otros SARM disponibles en nuestra lista, YK-11 está prohibido por las agencias de dopaje por ser drogas para mejorar el rendimiento.

Con esta noción, puede adivinar cuántos atletas & # 8217 ventajas hay dentro de este SARM en particular.

El mecanismo de YK11 se une a los receptores de andrógenos en los músculos y los huesos, mientras que la salud de la próstata no se verá afectada.

YK-11 Half-Life: 6-8 horas

7) Nutrobal (MK-677)

Nutrobal no es un SARM sino un agonista no peptídico del receptor de grelina, que de alguna manera funciona como los SARM.

Al igual que los SARM, Nutrobal actúa solo sobre un receptor selectivo que luego induce más reacciones bioquímicas.

Lo principal de Nutrobal puede replicar la activación de la hormona de crecimiento que conduce a la secreción de HGH y factor de crecimiento similar a la insulina (IGF-1). Esto lo hace útil para el ciclo de carga.

El efecto de Nutrobal, es decir, la producción de HGH e IGF-1, lo convierte en la mejor opción para los culturistas porque esto es lo que demandan, la masa muscular excesiva y el crecimiento corporal en general.

MK-677 también apoya la construcción de masa muscular magra sin aumentar la masa grasa.Los seres humanos experimentaron algunos otros efectos con Nutrobal además del aumento de la masa muscular, estos son una mayor densidad mineral ósea y ganancias de fuerza.

Vida media de Nutrobal: 24 horas

8) Stenabolic (SR9009)

Stenabolic solo se está sometiendo a múltiples investigaciones en animales en las que conduce a una mejora de la resistencia, reducción del colesterol, ansiedad, inflamación y peso.

Cuando estos efectos se convierten en humanos, a muchos atletas les encanta por su resistencia mejorada y su máximo rendimiento corporal.

El ritmo circadiano es cómo funciona el cuerpo humano durante el período del ciclo de 24 horas, tanto de día como de noche. Stenabolic fue creado para estudiar este ritmo que es notable para que los atletas mejoren su nivel de resistencia y energía.

Estos vienen después del uso potencial de glucosa y grasas en sangre que, mediante el uso de SR9009, aumenta el rendimiento y la potencia del núcleo del cuerpo.

Esto conducirá a una mejora drástica del rendimiento para lograr súper objetivos rápidamente.

Vida media estenabólica: 4 horas

Cómo Modulador selectivo del receptor de andrógenos ¿Trabaja?

Los SARM funcionan dirigiéndose a los receptores de andrógenos ubicados en diferentes partes del cuerpo. El efecto es selectivo debido a que los SARM son extremadamente valiosos para tratar ciertos tipos de afecciones médicas.

Los SARM también ayudan a erradicar los efectos secundarios en otras partes del cuerpo que no son inducidos por los compuestos de los SARM.

Es la razón por la que los SARM están diseñados para ejercer el mismo efecto que los esteroides anabólicos sin los efectos secundarios, estos son una forma más mejorada de tejidos específicos dirigidos que la terapia de reemplazo hormonal basada en testosterona.

El objetivo principal de los SARM se menciona anteriormente, pero actualmente todavía están en desarrollo.

Este no será el 100% selectivo con 0 posibilidades de que los tejidos impacten en el área no objetivo. Esto significa que los SARM ofrecen sus resultados con los efectos secundarios que son androgénicos y se centran en la próstata masculina.

¿Son legales los SARM?

En los EE. UU. Y otros países del mundo, los SARM no están aprobados para uso humano.

Su desarrollo comenzó en 1990, donde abordaron algunas inquietudes médicas, como la recuperación muscular posterior al cáncer, en la que los SARM eran efectivos. Aún así, los SARM no están pasando por muchos ensayos clínicos ya que muchas compañías farmacéuticas detuvieron su desarrollo.

El vendedor de los SARM a veces tiene que pagar multas más altas cuando intenta vender estos compuestos con la etiqueta “Solo para fines de investigación” en la parte posterior de la botella.

Algunos vendedores no mencionarán la lista de ingredientes que no se consideran legales o estos individuos son declarados culpables de violar la ley y acusados ​​de delitos graves.

Los atletas de todo el mundo que probaron SARM y su análisis de sangre mostró que los positivos fueron descalificados de los juegos, esto muestra que están siendo tratados como lo harán después de usar esteroides anabólicos. Pero aún así, en este momento, los SARM están disponibles en muchas tiendas en línea que afirman vender el compuesto 100% puro.

Aunque es muy poco probable que esté disponible la mayor pureza de los SARM y es casi imposible obtener una forma pura de SARM con tales productos locales no aprobados,

¿Cuáles son los beneficios de los SARM?

Se observa que la mayoría de los SARM brindan el mismo tipo de beneficios que los esteroides legales.

  • Resistencia y resistencia mejoradas
  • Aumento de la masa muscular
  • Reducción de grasa
  • Densidad ósea y muscular mejorada
  • Conservación de la masa magra

Otros beneficios de los SARM implicaron la ausencia de efectos secundarios importantes causados ​​por los esteroides anabólicos.

Estos efectos secundarios pueden destruir sus años de arduo trabajo y minimizar la capacidad de género en algunos hombres como la ginecomastia, que es un desarrollo de senos en el pecho de un hombre, la retención de agua que les da un aspecto hinchado.

Todos estos efectos secundarios se deben a la aromatización y al aumento del nivel de estrógenos.

Suplementos de SARMS (tipos y dosis)

Los SARM son mejores que los esteroides anabólicos porque no se convierten en DHT o estrógeno, ya que también se une al receptor de andrógenos.

De esta manera, no experimentará efectos secundarios femeninos con los SARM que son:

Ahora, sobre Prohormonas, Reaccionan en el cuerpo humano de la misma manera que los esteroides anabólicos, con la misma amplitud de beneficios y efectos secundarios. ¡Esto hace que tanto los esteroides anabólicos como las prohormonas sean iguales y los SARM sean mejores que AMBOS!

Apilando SARM y # 8211 ¿Qué pila de SARM es la mejor?

Es posible acumular varios SARM, pero por su seguridad, el mejor uso de los SARM al principio es usar un solo compuesto primero.

No se recomienda apilar SARM para los principiantes, ya que no saben mucho sobre qué SARM está causando qué efectos secundarios (ya que se utilizan varios SARM a la vez). Esto también eliminará el conocimiento sobre el efecto preciso de un SARM en particular.

Si ha estado usando un solo compuesto SARM durante algún tiempo y ahora desea realizar un cambio. Bueno, el uso de la pila de SARM puede generar beneficios adicionales, pero ¿conoce la acumulación de SARM?

Al igual que las pilas de esteroides, la idea de formar SARM Stack depende de sus objetivos de fitness. Ya sea que se esté inclinando hacia la fase de aumento de volumen o el corte, incluso podría ser por la fuerza que no conocemos, pero lo que sí sabemos es que obtendrá los beneficios en forma triple.

Hay dos pilas principales a las que deben aspirar los usuarios de SARM. Estos son:

1) Pila de SARM para aumentar el volumen

La pila de SARM para aumentar el volumen es para los hombres que buscan una masa más grande y aumentar todo su físico.

Una cosa sobre el La pila de SARM para aumentar el volumen es importante tener en cuenta que requería terapia posterior al ciclo, a diferencia de la pila de corte.

Con la pila de aumento de volumen de SARM, notará una cantidad considerable de mejoras de energía y verá aparecer mejoras más grandes relacionadas con los músculos. Esto aumentará los tiempos de ejercicio y le permitirá ejercitarse para obtener resultados más extensos.

La mejor pila de SARM para Bulking incluye Testolona y Ligandrol en 15 mg de dosis diarias durante 2 meses. Después de esto, los usuarios deben tomar un intervalo de 4 semanas y PCT.

Para los buscadores de fuerza, el uso de YK11 con Ligandrol es la opción más importante que beneficia la capacidad de levantamiento de pesas para obtener ganancias rápidas.

Esta pila puede ser buena durante 6 semanas, donde la dosis de Ligandrol debe ser de 20 mg mientras que YK-11 es de 10 mg por día.

2) Pila de SARM para cortar

Los SARM se crearon para tratar la enfermedad de desgaste muscular, como en el caso de los pacientes con cáncer, donde se observa la rotura de la masa magra.

De esta forma, puedes decir el papel de La pila de SARM para cortar es mucho más ordenada y efectiva durante la fase de corte.

Esta fase de corte exige la preservación de la masa magra al tiempo que reduce los tejidos grasos disponibles en la capa superior de los músculos. Y no hay nada mejor que los SARM combinados para hacerlo.

La pila efectiva de SARM para cortar solo debe incluir 2 compuestos durante un período estricto de 10 semanas. Ellos deberían ser:

No hay necesidad de PCT en la pila de corte, pero los usuarios deben tomar un descanso de 4 semanas, que es una especie de fase de recuperación.

Efectos secundarios del ciclo de SARM

No es cierto cuando la gente dice que los SARM carecen de efectos secundarios, a diferencia de los esteroides anabólicos.

En realidad, estos productos químicos de investigación son tóxicos como el próximo tipo disponible en sitios sombreados. Algunos de los SARM son detenidos por los productos farmacéuticos después de ser desarrollados y esto sucedió por razones graves.

Esto solo significaría que durante la fase de investigación, estos químicos han mostrado efectos misteriosos en la biología humana o los beneficios a corto plazo aguardan las complicaciones de salud a largo plazo.

Estos son los efectos secundarios que puede tener al hacer un ciclo completo de SARM.

  • Eventos cardiovasculares: ataque cardíaco y accidente cerebrovascular
  • Buen tipo reducido de colesterol (HDL)
  • Problemas de la vista
  • Cáncer
  • Daño hepático

Resultados de los SARM y # 8211 ¿Qué debe esperar?

Los resultados de los SARM vienen en muchas formas, dependiendo de los SARM que haya elegido para objetivos específicos de culturismo.

Debería obtener masa muscular desgarrada, volumen con fuerza adicional y ganancias de energía que nunca antes había notado.


Moduladores selectivos del receptor de andrógenos (SARM) y # 8211 Lo que los atletas deben saber

Los moduladores selectivos del receptor de andrógenos (SARM) son una clase de compuestos terapéuticos que tienen propiedades anabólicas similares a los esteroides anabólicos, pero con propiedades androgénicas reducidas (que producen características masculinas). Por ejemplo, el receptor de andrógenos se activa al unirse a andrógenos, como la testosterona. A diferencia de los esteroides anabólicos, que se unen a los receptores de andrógenos en muchos tejidos de todo el cuerpo, los SARM individuales se unen selectivamente a los receptores de andrógenos en ciertos tejidos, pero no en otros.

En entornos médicos, esto podría ser muy útil para estimular el crecimiento de tejidos específicos como músculos y huesos, al tiempo que evita efectos secundarios no deseados en otros tejidos como el hígado o la piel. Los SARM se están evaluando como un tratamiento clínico para la atrofia muscular causada por varias enfermedades, como la osteoporosis, el cáncer, la insuficiencia cardíaca, la enfermedad pulmonar obstructiva crónica, la enfermedad hepática en etapa terminal, la enfermedad renal en etapa terminal y el VIH.

Hasta la fecha, todos los SARM son solo para fines de investigación.

¿Están prohibidos los SARM en la Lista de Prohibiciones de la Agencia Mundial Antidopaje (WADA)?

Todos los SARM son prohibido en todo momento (tanto dentro como fuera de competición) para todos los deportistas, desde los que compiten al más alto nivel deportivo hasta los que compiten a nivel recreativo. Los SARM se enumeran en la categoría de "Otros agentes anabólicos" en la sección S1.2 de la Lista de prohibiciones de WADA.

Los ejemplos de SARM incluyen: ostarine (Enobosarm, MK 2866), andarine, LGD-4033 (ligandrol) y RAD140. [3] Los SARM tienen el potencial de ser mal utilizados para mejorar el rendimiento en el deporte debido a sus propiedades anabólicas, así como a su capacidad para estimular los receptores de andrógenos en los músculos y huesos, lo que conduce al crecimiento óseo y muscular.

¿Qué pasa si mi médico me receta un SARM?

Actualmente, no hay SARM aprobados por la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA) disponibles para prescripción médica. Todos los SARM son medicamentos en investigación, por lo que no es legal que su médico le recete un SARM. Los atletas que deseen participar en ensayos clínicos que involucren sustancias prohibidas deben comunicarse con la USADA para obtener una Exención por uso terapéutico (AUT).

¿Cuáles son los riesgos para la salud asociados con el SARMS?

La FDA ha advertido a los consumidores sobre los posibles efectos secundarios potencialmente mortales de los SARM, incluido un mayor riesgo de ataque cardíaco y accidente cerebrovascular.

Se desconocen los efectos a largo plazo del uso de SARM.

¿Se pueden encontrar SARM en suplementos dietéticos?

Los SARM no son ingredientes legales para ningún suplemento dietético. Sin embargo, hay muchos suplementos dietéticos en el mercado que están contaminados o anuncian que contienen SARM.

Actualmente, hay más de 120 de estos productos incluidos en la Lista de alto riesgo del Suplemento 411. Los suplementos dietéticos que contienen SARM podrían presentar riesgos importantes para la salud de los atletas y provocar un resultado positivo en la prueba. Los atletas deben tener en cuenta que los ingredientes del SARM pueden aparecer en las etiquetas de los suplementos dietéticos con varios nombres.

Los siguientes son ejemplos de SARM que se comercializan con frecuencia e ilegalmente en suplementos dietéticos o como sustancias químicas de investigación:

  • Ostarine (Enobosarm, MK2866, S22)
  • Andarine (S4)
  • LGD-4033 (Ligandrol)
  • LGD-3033
  • TT-701
  • RAD140 (Testolona)
  • S23

Las siguientes sustancias prohibidas también se comercializan en ocasiones como SARM:

  • SR9009 (estenabólico)
  • Ibutamoren (MK-677, Nutrabol)
  • GW501516 (GW1516, Cardarine, Endurobol)
  • YK-11


La terapia dirigida a los receptores de andrógenos abre un nuevo capítulo para los cánceres de mama impulsados ​​por hormonas

La activación del receptor de andrógenos ejerce una potente actividad antitumoral en el cáncer de mama con receptor de estrógeno positivo. El estudio internacional, publicado en Medicina de la naturaleza (18 de enero), tiene importantes implicaciones terapéuticas para las mujeres con cánceres de mama metastásicos que son receptores de estrógenos positivos, incluidas aquellas que se han vuelto resistentes a las formas actuales de terapia endocrina.

“Ofrecemos nuevas pruebas experimentales convincentes de que los fármacos estimulantes del receptor de andrógenos pueden ser más eficaces que los tratamientos estándar de atención existentes (p. Ej., Tamoxifeno) o nuevos (p. Ej. Palbociclib) y, en el caso de estos últimos, pueden combinarse para mejorar la inhibición del crecimiento ”, Dice Wayne Tilley, investigador principal del estudio de la Universidad de Adelaide, Australia.

En la pubertad y durante la vida adulta se sabe que el estrógeno estimula el crecimiento del cáncer de mama y los andrógenos lo inhiben. Entre las décadas de 1940 y 1980, los compuestos androgénicos se utilizaron como terapias contra el cáncer de mama, pero a pesar de la eficacia clínica, el enfoque cayó en desgracia debido a los efectos secundarios masculinizantes (como el vello facial, el acné, el aumento del hematocrito o la toxicidad hepática) y el advenimiento de los antiinflamatorios. terapias endocrinas estrogénicas. Con hasta un 35% de las mujeres con cáncer de mama con receptor de estrógeno positivo que eventualmente se vuelven resistentes a las terapias hormonales actuales, la necesidad de estrategias alternativas ha vuelto a despertar el interés en la terapia con andrógenos. Se sabe que casi todos los cánceres de mama con receptores de estrógenos positivos también expresan receptores de andrógenos y ahora están disponibles clínicamente moduladores de receptores de andrógenos selectivos no virilizantes (SARM).

En el estudio actual, Tilley y su colega utilizaron líneas celulares de cáncer de mama humano que estaban disponibles comercialmente, así como tejido extraído de pacientes con cáncer de mama para demostrar que la activación directa de los receptores de andrógenos tanto por andrógenos como por enobosarm (un fármaco con actividad agonista del receptor de andrógenos) ha potente actividad antitumoral en el cáncer de mama con receptor de estrógeno positivo. El equipo demostró que los tumores positivos al estrógeno tratados con estrógeno solo tenían un índice de proliferación más alto (positividad de ki67) en comparación con los explantes de pacientes tratados con estrógeno más el potente andrógeno natural, 5 alfa dihidrotestosterona. En conjunto, los datos proporcionan una clara evidencia de un efecto antiproliferativo de los andrógenos en los tejidos mamarios clínicos expuestos a los estrógenos y sugieren que los eventos de señalización del receptor de andrógenos que limitan el crecimiento normal de la mama pueden reactivarse mediante el agonismo del receptor de andrógenos.

“Tomados en conjunto, estos datos abren un capítulo potencialmente nuevo en el tratamiento del cáncer de mama impulsado por hormonas, uno que se centra en estimular el receptor de andrógenos en lugar de bloquear el receptor de hormonas sexuales femeninas y se espera, dado cómo funcionan, que lo hagan tienen menos efectos secundarios que los tratamientos que bloquean el receptor de estrógeno ”, dice Carlo Palmieri, de la Universidad de Liverpool, Reino Unido, quien fue uno de los investigadores del estudio.

Un estudio clínico de fase II, presentado por Palmieri en la reunión de San Antonio Breast Cancer de 2020, evaluó la eficacia de la dosis diaria oral de 9 mg y 18 mg de enobosarm en 136 mujeres que habían sido tratadas previamente con estrógeno positivo y cáncer de mama HER2 negativo que tenían progresión del cáncer de mama. . Los resultados demostraron una tasa de beneficio clínico clínicamente significativo del 32% y el 29% en las cohortes de 9 mg y 18 mg diarios de enobosarm, respectivamente. Enobosarm fue bien tolerado y las mujeres informaron mejoras en las medidas de calidad de vida como movilidad, ansiedad y malestar por dolor. “Fundamentalmente, los resultados observados en el laboratorio se manifiestan en la clínica, donde enobosarm muestra actividad cuando se administra a mujeres con cáncer de mama avanzado. Es importante destacar que para un nuevo medicamento también fue bien tolerado y mejoró la calidad de vida ”, dice Palmieri.


SARM contienen andrógenos. Los andrógenos son un tipo único de hormona que les da a los esteroides y prohormonas sus propiedades de crecimiento muscular. Cuando toma esteroides tradicionales, normalmente bombea andrógenos directamente a su cuerpo.

Tomar SARM es como tomar una forma indirecta de esteroides. En lugar de simplemente bombear su cuerpo con andrógenos, los SARM afectan la forma en que su cuerpo recibe los andrógenos en sus sitios receptores.

Hablando científicamente, los andrógenos actúan como ligandos, lo que significa que unen moléculas a otras moléculas. Se conectan principalmente a los receptores de andrógenos celulares o AR. Los AR de su cuerpo están integrados en un conducto de transducción de señales compuesto que, en última instancia, conduce a una expresión magnificada de genes particulares, como los genes responsables del crecimiento y desarrollo muscular.

La parte del "modulador selectivo del receptor" del SARM se refiere al hecho de que es un fármaco que puede obstruir o promover los receptores hormonales en diferentes condiciones. Es "selectivo" porque puede optar por hacer cualquiera de las dos. Al “modular” los “receptores” hormonales, el modulador selectivo del receptor de andrógenos puede ayudarlo a lograr varios objetivos de salud y estado físico.

No es necesario que sepa todas esas cosas científicas para tomar SARM, pero le brinda algunos antecedentes sobre lo que está bombeando a su cuerpo.

Lo que es importante saber es que los SARM son 200 veces más potentes y 80 veces más selectivos en lo que respecta al crecimiento muscular en comparación con los suplementos de esteroides legales como Depo-Testosterone (cipionato de testosterona).

¿Cómo funcionan los SARM?

Los SARM están diseñados para aumentar la masa y la fuerza del músculo esquelético de las personas con deficiencia de andrógenos. A medida que el cuerpo envejece, perdemos gradualmente nuestra resistencia, potencia y masa muscular esquelética.

Puede tomar SARM de dos formas principales:

Los SARM supuestamente producen resultados similares a la testosterona. También producen mejoras dependientes de la dosis en la densidad mineral ósea y la fuerza motorizada. También hay alguna evidencia de que disminuyen la grasa corporal y aumentan la masa muscular magra.

Beneficios de los SARM

& # 8212 No tóxico (no dañará su hígado)
& # 8212 evita la pérdida ósea
& # 8212 reduce el riesgo de problemas de próstata
& # 8212 no obstaculizará su HPTA
& # 8212 Beneficios similares a la testosterona en términos de masa muscular, pérdida de grasa y crecimiento muscular magro
& # 8212 Sin conversión de estrógenos y dihidrotestosterona (se requiere una terapia post-ciclo reducida)
& # 8212 Tiempos de recuperación post-entrenamiento y post-lesión más rápidos

Efectos secundarios de los SARM

Como todos los medicamentos que afectan sus niveles de testosterona, los SARM inevitablemente provocarán efectos secundarios cuando se toman durante períodos prolongados en dosis altas. Algunos de los efectos secundarios asociados con la toma de SARM durante más de cuatro semanas incluyen:

& # 8212 Atrofia testicular (tamaño reducido de los testículos)
& # 8212 Ginecomastia (senos masculinos)
& # 8212 Desarrollo de características masculinas en mujeres (virilización)
& # 8212 Calvicie
& # 8212 Acné

Puede limitar estos efectos secundarios controlando cuidadosamente sus dosis, activando y desactivando los SARM y manteniendo las terapias posteriores al ciclo adecuadas.

SARM más populares

Actualmente, existen cuatro SARM principales en el mercado. De todos los que se enumeran aquí, Ostarine es el más controvertido (consulte la sección Demanda a continuación para obtener más explicaciones):

& # 8212 LGD-4033: Este es un poderoso suplemento no esteroideo dirigido a los culturistas que desean desarrollar músculo magro mientras reducen la grasa corporal.

& # 8212 Ostarine (MK-2866): selectivo para la actividad anabólica en ciertos receptores de andrógenos y eficaz para aumentar la masa corporal magra y recuperarse de una lesión.

& # 8212 S4 (Andarine): selectivo para el tejido óseo y destinado a curar la osteoporosis. Probablemente el SARM más débil disponible en la actualidad en términos de efectos sobre la próstata y los órganos sexuales.

& # 8212 GW 501516 (Cardarine): quema grasa sin pérdida de masa muscular y mejora enormemente la resistencia. Utilizado por los mejores atletas y culturistas y, a veces, llamado "el rey de los suplementos de resistencia".

Cómo comprar SARM

Los SARM son difíciles de encontrar en línea, especialmente porque se han vuelto cada vez menos legales en el transcurso de 2015.

Con los minoristas de SARM apareciendo en línea (y siendo eliminados) aparentemente todas las semanas, su mejor opción es buscar en Google minoristas de SARM en su área.

Tenga cuidado de dónde da su dinero para comprar SARM: con el aumento de las medidas enérgicas legales, nunca se sabe cuándo un sitio web se cerrará o desaparecerá repentinamente de la noche a la mañana.

¿Por qué los SARM son tan populares de repente?

Los SARM se han vuelto populares de repente en 2015. ¿Por qué?

Bueno, se remonta a la prohibición de las prohormonas. Los culturistas como Patrick Arnold introdujeron por primera vez al mundo las prohormonas a mediados de la década de 1990. Las prohormonas funcionaron como una versión "más ligera" de los esteroides. Eran más seguros y tenían menos efectos secundarios, pero aún ofrecían las ganancias deseadas por los culturistas.

En diciembre de 2014, Estados Unidos aprobó algo llamado Ley de control de esteroides anabólicos de diseño (DASCA). Ese proyecto de ley prohibió efectivamente las prohormonas del mercado. Entre otras cosas, pidió multas de 500.000 dólares a cualquiera que vendiera prohormonas.

Por supuesto, la demanda de esteroides no desapareció de la noche a la mañana. En cambio, el mercado simplemente decidió encontrar una laguna en la factura y luego explotar esa laguna para obtener el máximo beneficio.

Ahí es donde surgen los SARM. Los SARM se basan en un vacío legal porque son compuestos no esteroides que, sin embargo, activan los receptores de andrógenos.

Son controvertidos y probablemente ilegales. Hablaremos sobre la legalidad de los SARM a continuación.

Los SARM no son suplementos legales

El 21 de octubre de 2015, se presentó la primera demanda de SARM. La industria disfrutó de un gran aumento durante los primeros 10 meses de 2015, pero la mayoría de la gente adivinó que la laguna legal eventualmente se cerraría y que los fabricantes de SARM enfrentarían una ofensiva de la FDA.

Los SARM no violaron específicamente DASCA. Es por eso que inicialmente se anunciaron como la próxima gran novedad en la industria de los suplementos, especialmente después de que se demostró que varios de ellos funcionan casi tan bien como los suplementos de esteroides anabólicos tradicionales.

El problema con los SARM es que se describen con mayor precisión como productos químicos de investigación. No son completamente ilegales porque no están restringidos ni programados oficialmente por la FDA. Pero al mismo tiempo, es falso vender productos químicos de investigación como suplementos nutricionales en tiendas de suplementos.

Los SARM se encuentran bajo investigación activa y pueden tener propósitos médicos legítimos en el futuro. Pero eso no significa que cualquier fabricante de suplementos de culturismo que decida hacerlo debería llevarlos al mercado rápidamente.

Por esa razón, parece que era solo cuestión de tiempo antes de que la FDA o la DEA decidieran tomar medidas.

La primera demanda de SARM fue presentada en California por Nutrition Distribution LLC contra IronMagLabs. Puede leer los detalles de esa demanda a continuación.

Demandas SARM

IronMagLabs fue acusado de lo siguiente:

& # 8212 Publicidad falsa (según la Ley Lanham § 43 (a) (1) (B))
& # 8212 Competencia desleal en California (Sección 17200 del Código de Profesiones y Negocios de California)
& # 8212 Competencia desleal de California (Código de negocios y profesiones, sección 17500)

La denuncia estaba dirigida específicamente a dos suplementos de IronMagLabs: Osta RX y Super DMZ, los cuales supuestamente se vendieron incorrectamente como suplementos dietéticos.

El problema es que ambos suplementos contienen el SARM Ostarine, que se encuentra bajo investigación activa como un nuevo fármaco farmacéutico y no se reconoce como seguro y eficaz.

IronMagLabs afirmó que la demanda era "frívola" y prometió luchar contra ella "hasta el final".